Anti-RNF8 Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – O76064

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RNF8

• Die E3-Ubiquitin-Protein-Ligase RNF8 (RING-Finger-Protein 8) ist ein zentraler Mediator der DNA-Schadensantwort. Sie wird durch ATM-phosphoryliertes MDC1 zu Doppelstrangbrüchen rekrutiert, wo sie die „Lys-63“-verknüpfte Ubiquitinierung der Histone H2A und H2AX katalysiert. Dies erleichtert die Assemblierung von DNA-Reparaturproteinen wie BRCA1 und TP53BP1 in durch ionisierende Strahlung induzierten Foki.
  Verwandte Referenzen: PMID:18001824, PMID:18006705
• RNF8 fördert die Rekrutierung des Fanconi-Anämie-Komplexes und Faktoren wie FAAP20 zu DNA-Interstrangvernetzungen durch Vermittlung der H2A/H2AX-Ubiquitinierung und koordiniert zudem die ATM-abhängige transkriptionelle Stilllegung in der Nähe von DSBs, um Kollisionen zwischen Transkription und Reparatur zu verhindern.
• Durch unterschiedliche Interaktionen mit E2-Enzymen kann RNF8 „Lys-48“-verknüpfte Polyubiquitinketten bilden (z. B. mit UBE2L6), was zur proteasomalen Degradation von Substraten wie CHEK2, JMJD2A/KDM4A und KU80/XRCC5 führt. Dadurch moduliert es die Auswahl des Reparaturwegs und die Chromatinzugänglichkeit.
  Verwandte Referenzen: PMID:11322894, PMID:14981089, PMID:17724460
• Es trägt zur höhergeordneten Chromatin-Dekondensation bei und aktiviert die ATM-Kinase indirekt, indem es die Histon-H2B-Ubiquitinierung fördert, die die H4K16-Acetylierung auslöst.
• RNF8 ist essenziell für die Spermatogenese, treibt den Histonaustausch während der Spermienreifung an und beteiligt sich über seine Rolle bei der DSB-Reparatur an der Klassenwechselrekombination im Immunsystem.
  Verwandte Referenzen: PMID:22865450
• Das Protein lokalisiert überwiegend im Zellkern, kommt zusätzlich im Zytoplasma, am Midbody und an Telomeren vor – was mit seinen vielseitigen Rollen bei Zellzyklusprogression und Genomstabilität übereinstimmt.
• Die Gewebeexpression ist ubiquität, mit höchsten Gehalten in Gehirn, Thymus und Leber während der fetoalen Entwicklung sowie in Gehirn und Hoden bei Erwachsenen. Dies unterstreicht seine breite Bedeutung für DNA-Reparatur und Chromatinregulation.
• Das RNF8-Protein enthält eine RING-Finger-Domäne, wird als Phosphoprotein klassifiziert und hat ein Molekulargewicht von ~55,5 kDa (UniProt: 55518 Da). Schlagworte heben zudem seine Beteiligung an Wirt-Virus-Interaktionen, Metallbindung (Zink) und Ubiquitin-Konjugation hervor.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den N-terminalen 1–260 Aminosäuren des menschlichen RNF8; daher kann der Antikörper Epitope im N-terminalen Bereich erkennen, einschließlich der FHA-Domäne, die an phosphoabhängigen Interaktionen beteiligt ist.
• Für den Western Blot wandert RNF8 bei einer scheinbaren Molekülmasse von ~56 kDa in humanen, murinen und Ratten-Zelllysaten; führen Sie geeignete Positiv- und Negativkontrollen durch, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für IHC-P optimieren Sie gegebenenfalls die Antigen-Retrieval (z. B. Citratpuffer, pH 6,0) und validieren Sie in Geweben mit bekannter RNF8-Expression wie Hoden oder Gehirn.
• Für ELISA müssen Endnutzer die optimale Beschichtungskonzentration und Detektionsbedingungen mit dem rekombinanten Antigen oder relevanten Probenarten selbst bestimmen.
• Kreuzreaktivität mit RNF8 aus Maus und Ratte wurde berichtet; überprüfen Sie die Leistung in den relevanten Modellsystemen vor dem routinemäßigen Einsatz.

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