Anti-RNF4-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, ELISA – P78317

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RNF4

• RNF4 (SLX5, SNURF) ist eine E3-Ubiquitin-Protein-Ligase, die spezifisch an polysumoylierte Ketten bindet und die Polyubiquitinierung vermittelt (Lys-6-, Lys-11-, Lys-48- und Lys-63-Verknüpfungen), wodurch Substrate für den proteasomalen Abbau markiert werden.
  Zugehörige Referenzen: PMID:18408734, PMID:19307308, PMID:35013556

• Es reguliert den Abbau wichtiger zellulärer Proteine, darunter PML, den transkriptionellen Aktivator PEA3 und sumoyliertes PARP1, und spielt sowohl bei der Transkriptionskontrolle als auch bei der DNA-Schadensantwort eine Rolle.
  Zugehörige Referenzen: PMID:18408734, PMID:19307308, PMID:20943951, PMID:35013556

• RNF4 ist für die Chromosomenausrichtung und den Spindelaufbau während der Mitose von entscheidender Bedeutung, indem es polysumoyliertes CENPI im Kinetochor-Komplex CENPH-CENPI-CENPK für den Abbau markiert.
  Zugehörige Referenzen: PMID:20212317

• Es moduliert die zellulären Reaktionen auf Hypoxie und Hitzeschock, indem es jeweils den Abbau von EPAS1/HIF-2α und PARP1 vermittelt.
  Zugehörige Referenzen: PMID:19779455, PMID:20026589

• Alternativ kann RNF4 an DNA/Nukleosomen binden und die basale sowie die durch Steroidrezeptoren vermittelte Transkription verstärken, was auf eine direkte Funktion bei der Transkriptionsregulation hindeutet.
  Zugehörige Referenzen: PMID:12885770

• Das Protein enthält eine RING-Finger-Domäne und mehrere Zinkfinger-Motive, was mit seinen DNA-Bindungs- und E3-Ligase-Aktivitäten übereinstimmt (Schlüsselwörter: DNA-Bindung, Metallbindung, Zink, Zinkfinger).

• Auf subzellulärer Ebene ist RNF4 im Zytoplasma, im Zellkern und in den PML-Kernkörperchen lokalisiert, was seine Beteiligung sowohl an nukleären als auch an zytoplasmatischen Prozessen widerspiegelt.

• Es wird in vielen Geweben weit verbreitet in niedrigen Mengen exprimiert, mit hoher Expression im Hoden, was auf eine spezialisierte Rolle bei der Entwicklung von Keimzellen hindeutet.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Der Immunogen umfasst die Aminosäuren 1–190 des humanen RNF4 und deckt die N-terminalen Region ab, die mehrere Zinkfinger-Motive und die RING-Domäne enthält. Dieses Design kann Antikörper hervorbringen, die sowohl das vollständige Protein als auch N-terminale Fragmente erkennen.
• Für den Western Blot wird für unmodifiziertes RNF4 eine Bande bei etwa 21 kDa erwartet. Aufgrund umfangreicher posttranslationaler Modifikationen (Sumoylierung, Ubiquitinierung) können zusätzliche Banden beobachtet werden. Die Validierung sollte in Proben mit hoher endogener RNF4-Expression, beispielsweise Hodengewebe, erfolgen.
• Bei ELISA-Anwendungen sollte eine Beschichtung mit dem rekombinanten Immunogen oder sumoylierten Substraten in Betracht gezogen werden, um die Spezifität zu bestätigen; die Bedingungen für den indirekten ELISA sollten empirisch bestimmt werden.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte wurde berichtet; die Sequenzhomologie in der Immunogenregion sollte überprüft werden, da die N-terminale Sequenz zwischen diesen Spezies hochkonserviert ist.

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