Anti-RhoGAP (p190-B) Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA – Q13017

Wesentliche Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RhoGAP

• Das Rho-GTPase-aktivierende Protein 5 (ARHGAP5, auch bekannt als p190-B, RhoGAP5) ist ein Mitglied der RhoGAP-Familie und fungiert als GTPase-aktivierendes Protein (GAP) für kleine GTPasen der Rho-Familie, indem es deren intrinsische GTP-Hydrolyseaktivität steigert und dadurch die Signalübertragung beendet (PubMed:8537347). Verwandte Referenzen: PMID:8537347
• Das Protein wird alternativ gespleißt und erzeugt mehrere Isoformen, die eine gewebespezifische Expression und funktionelle Vielfalt aufweisen können.
• ARHGAP5 ist hauptsächlich im Zytoplasma lokalisiert und kann mit der Zellmembran assoziieren, was seiner Rolle bei der Regulation von Rho-GTPasen an membrannahen Signalübertragungsstellen entspricht.
• Das Protein ist ein Phosphoprotein, und seine Aktivität kann durch Tyrosinphosphorylierung moduliert werden, wodurch es mit Signalwegen von Wachstumsfaktoren und Integrinen verknüpft ist.
• Es wird auf Proteinebene spezifisch in Hautfibroblasten nachgewiesen, was auf eine Rolle in der Fibroblastenbiologie und möglicherweise bei der Wundheilung oder dem Umbau des Bindegewebes hindeutet.
• Schlüsselwörter aus UniProt: 3D-Struktur, alternatives Spleißen, Zellmembran, Zytoplasma, GTPase-Aktivierung, Membran, Nitrierung, Phosphoprotein, proteomische Identifizierung, Referenzproteom, Repeat. Diese heben seine strukturellen und regulatorischen Eigenschaften hervor.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 1150–1300 des humanen RhoGAP (Q13017), einer Region, die über Speziesgrenzen hinweg gut konserviert sein kann (Kreuzreaktion mit Maus und Ratte). Validieren Sie die Spezifität in der jeweiligen Spezies durch Sequenzalignment oder eine initiale Western-Blot-Analyse.
• Für Western Blotting beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 172 kDa. Verwenden Sie geeignete Gelkonzentrationen (z. B. 6–8 % SDS-PAGE) und Ladekontrollen. Bestätigen Sie die Bandspezifität mithilfe von Lysaten positiver Kontrollen (z. B. Hautfibroblastenlysate auf Grundlage der Daten zur Gewebeexpression).
• Optimieren Sie bei Immunpräzipitations- (IP-)Experimenten die Antikörperkonzentration durch Titration und schließen Sie geeignete IgG-Kontrollen ein. Erwägen Sie eine Quervernetzung des Antikörpers mit den Beads, um Interferenzen durch die schwere Kette bei der anschließenden WB-Detektion zu reduzieren.
• Verwenden Sie den Antikörper beim ELISA je nach Assayformat zusammen mit einem passenden Detektionsantikörper oder als Fangantikörper. Validieren Sie ihn mit rekombinantem RhoGAP-Protein oder Zelllysaten, die das Zielprotein exprimieren.
• Da es sich um einen monoklonalen Kaninchenantikörper handelt, ist eine gleichbleibende Leistung zwischen den Chargen zu erwarten. Validieren Sie jedoch jede neue Charge erneut in Ihrer spezifischen Anwendung und Ihrem Probensystem.

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