Anti-Rhodopsin Kaninchen-polyclonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P08100

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Rhodopsin

• Rhodopsin (auch bekannt als Opsin-2) ist ein G-Protein-gekoppeltes Photorezeptorprotein, das beim Menschen vom RHO-Gen kodiert wird und für das Sehen bei schlechten Lichtverhältnissen essenziell ist.
• Es funktioniert durch die Aktivierung der G-Protein-Transduzin (Gt)-Signalkaskade nach Absorption von Photonen durch sein kovalent gebundenes 11-cis-Retinal-Chromophor, das zu All-trans-Retinal isomerisiert. Dies induziert eine Konformationsänderung, die die Phototransduktion auslöst. Verwandte Referenzen: PMID:6140680 PMID:7846071 PMID:8107847
• Dieser Rezeptor wird für die Lebensfähigkeit postnataler Photorezeptorzellen benötigt und ist kritisch für die Bildung von Stäbchenäußeren Segmenten. Verwandte Referenzen: PMID:12566452 PMID:2215617
• Die Signalbeendigung erfolgt durch Rezeptorphosphorylierung, die die Bindung von Arrestin (SAG) und die Verdrängung der G-Protein-α-Untereinheit fördert. Verwandte Referenzen: PMID:26200343
• Rhodopsin ist ausschließlich auf der Membran der äußeren Segmente von Photorezeptoren lokalisiert, wo es den Hauptproteinbestandteil der Stäbchenscheiben bildet.
• Das Protein erfährt mehrere posttranslationale Modifikationen einschließlich Acetylierung, Palmitoylierung, Phosphorylierung und Glykosylierung und enthält eine essentielle Disulfidbindung; es bindet das Chromophor Retinal und ein Zinkion.
• Es wird spezifisch in stabförmigen Photorezeptorzellen exprimiert, die die skotopische (Dämmerlicht-)Sicht vermitteln.
• Mutationen in RHO sind mit Netzhauterkrankungen wie Retinitis pigmentosa und angeborener stationärer Nachtblindheit verbunden.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das der C-terminalen Region (Aminosäuren 200–348) von menschlichem Rhodopsin (NP_000530.1) entspricht. Diese Region ist relativ konserviert, was zur berichteten Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte beitragen kann.
• Für das Western Blotting beträgt das vorausgesagte Molekulargewicht von unmodifiziertem menschlichem Rhodopsin etwa 39 kDa; Glykosylierung und andere Modifikationen können jedoch zu Bandenverschiebungen führen. Fügen Sie geeignete Positivkontrollen (z. B. Netzhautgewebslysat) hinzu und berücksichtigen Sie die Membranproteinnatur des Targets.
• Für die Immunhistochemie (Paraffin) sollten die Antigen-Retrieval-Bedingungen für Netzhautschnitte optimiert werden; ein Signal ist in den äußeren Segmenten der Photorezeptoren zu erwarten. Endogene Peroxidaseblockierung und eine angemessene Gewebefixierung werden empfohlen.
• ELISA-Anwendungen können Peptid-Wettbewerbsassays zur Bestätigung der Spezifität erfordern; erwägen Sie die Beschichtung mit Immunogenpeptid oder rekombinantem Protein.
• Wie bei jedem polyclonalen Antikörper ist eine Charge-zu-Charge-Variabilität möglich; validieren Sie neue Chargen im relevanten Probensystem vor der großangelegten Verwendung.

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