Anti-REST/NRSF Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA - Q13127

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: REST/NRSF-Funktion und Lokalisierung

• REST/NRSF ist ein Zinkfinger-Transkriptionsrepressor, der an das neuron-restriktive Silencer-Element (NRSE) bindet und die neuronale Genexpression in nicht-neuronalen Zellen unterdrückt. Verwandte Referenzen: PMID:11741002 PMID:11779185 PMID:12399542
• Es rekrutiert die Korepressoren SIN3A und RCOR1, die wiederum Histon-Deacetylasen rekrutieren, und vermittelt auch Repression über den BHC-Komplex durch Histon-Deacetylierung und -Demethylierung, was zur Chromatin-Kompaktierung führt. Verwandte Referenzen: PMID:10449787 PMID:10734093
• REST kann die Transkription auch durch Rekrutierung von CDYL und der Histon-Methyltransferase EHMT2 unterdrücken, ein Prozess, der möglicherweise für die Unterdrückung zellulärer Transformation wichtig ist. Verwandte Referenzen: PMID:19061646
• In neuralen Stammzellen erhält REST die Repression neuronaler Gene aufrecht, bewahrt die Ruhephase und verhindert eine vorzeitige Differenzierung. Verwandte Referenzen: PMID:21258371
• Unter hypoxischen Bedingungen wirkt REST als Schlüsselrepressor, indem es direkt an NRSE-Stellen auf den Promotoren der Zielgene bindet; es vermittelt auch Stressresistenz im alternden Gehirn und trägt zum ischämie-induzierten neuronalen Zelltod bei, teilweise durch Repression von miR-132. Verwandte Referenzen: PMID:27531581 PMID:24670762
• Alternatives Spleißen erzeugt Isoformen, einschließlich einer kurzen Isoform, die mit der Vollversion von REST heterodimerisieren und deren Repressoraktivität hemmen kann; SRRM4-abhängiges Spleißen erzeugt eine REST-Isoform, die für das Hören essentiell ist. Verwandte Referenzen: PMID:11741002 PMID:11779185
• REST ist überwiegend nukleär, kann aber auch im Zytoplasma nachgewiesen werden; es ist ein Phosphoprotein, Ubiquitinierung unterworfen und enthält mehrere Zinkfinger-Domänen.
• Es wird ubiquitär exprimiert, mit höheren Spiegeln in lymphatischen Geweben; im Gehirn wird REST in spezifischen neuronalen Populationen exprimiert und sein nukleärer Verlust ist mit Alzheimer-Krankheit, Parkinson-Krankheit und Demenz mit Lewy-Körperchen assoziiert, wo es sich möglicherweise in Lewy-Körperchen ansammelt. Verwandte Referenzen: PMID:8568247 PMID:24670762 PMID:30684677 PMID:26053433

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid aus den Aminosäuren 100–200 von humanem REST/NRSF; diese Region kann in mehreren Isoformen vorhanden sein. Ziehen Sie Sequenzalignment in Betracht, um die potenzielle Isoform-Erkennung zu bewerten.
• Für Western Blotting (WB) ist eine Bande bei etwa 122 kDa zu erwarten, was dem vorhergesagten Molekulargewicht entspricht. Posttranslationale Modifikationen (z.B. Phosphorylierung, Ubiquitinierung) können leichte Wanderungsverschiebungen oder zusätzliche Banden verursachen.
• REST ist ein nukleäres Protein; effiziente Nuklearextraktionsprotokolle oder Gesamtzelllysate, die nukleäre Fraktionen enthalten, können den Nachweis in WB und IP verbessern.
• Für die Immunpräzipitation (IP) bietet das Kaninchen-monoklonale Format typischerweise hohe Spezifität und niedrige Hintergrundwerte; schließen Sie eine geeignete Isotypenkontrolle ein.
• Verwenden Sie in ELISA einen Peptid-Blockierungstest, um die spezifische Bindung zu verifizieren; das Immunogen-Peptid kann als positive Kontrolle dienen.
• Der Antikörper zeigt Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-REST; validieren Sie die Assay-Bedingungen für die beabsichtigte Spezies, da die Epitop-Konservierung die Leistung beeinflussen kann.

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