Anti-RB-polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – P06400

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RB

• RB (Retinoblastom-assoziiertes Protein) ist ein Tumorsuppressor und ein zentraler Regulator des Übergangs vom G1- zum S-Abschnitt des Zellzyklus. Die hypophosphorylierte Form bindet E2F-Transkriptionsfaktoren und unterdrückt die Transkription von Genen, die für den Eintritt in die S-Phase erforderlich sind. Die durch Cyclin/CDK abhängige Phosphorylierung setzt E2Fs frei und löst den Zellzyklusfortschritt aus (PubMed:10499802). RB fördert außerdem den Übergang von G0 zu G1 durch Phosphorylierung mittels CDK3/Cyclin-C (PubMed:15084261).

  Zugehörige Referenzen: PMID:10499802 PMID:15084261

• RB ist direkt an der Bildung von Heterochromatin beteiligt, indem es die Histonmethylierung stabilisiert und die Histonmethyltransferasen SUV39H1, KMT5B und KMT5C rekrutiert. Es kontrolliert die Trimethylierung von Lysin-20 des Histons H4, was zu einer epigenetischen Transkriptionsrepression führt.

• Vermittelt die durch SMARCA4/BRG1 ausgelöste Transkriptionsrepression durch Rekrutierung eines Histondeacetylase-(HDAC-)Komplexes an den c-FOS-Promotor. In ruhenden Neuronen hemmt ein phospho-RB1-HDAC1-Repressorkomplex die c-FOS-Transkription; der Kalziumeinstrom dephosphoryliert RB1 über Calcineurin und hebt dadurch die Repression auf.

• Die subzelluläre Lokalisation umfasst den Zellkern und das Zytoplasma.

• Wird in der Netzhaut und in Keratinozyten der Vorhaut auf Proteinebene exprimiert (PubMed:20940255).

  Zugehörige Referenzen: PMID:20940255

• Unterliegt wichtigen posttranslationalen Modifikationen: Acetylierung, Methylierung und umfangreiche Phosphorylierung, die seine Aktivität und Interaktionen regulieren.

• Während einer Virusinfektion binden das große T-Antigen von SV40, das HPV-E7-Protein oder das Adenovirus-E1A-Protein an RB1, wodurch der RB1-E2F1-Komplex gestört und die Tumorsuppressorfunktion von RB1 aufgehoben wird.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht der C-terminalen Region (AS 701–928), die gut konserviert ist und wahrscheinlich eine Reaktivität gegen vollständiges RB (~106 kDa) hervorruft.
• Für den Western Blot sollte eine Proteinleiter im mittleren Größenbereich verwendet werden, um die Bande bei 106 kDa deutlich aufzulösen. Für die optimale Detektion von endogenem RB werden Kernextrakte empfohlen. Validieren Sie den Antikörper in geeigneten humanen Zelllinien, beispielsweise solchen mit bekanntem RB-Status, und ziehen Sie bei beobachtetem Hintergrundsignal eine Kontrolle mit einem blockierenden Peptid in Betracht.
• Optimieren Sie bei IF/ICC die Bedingungen für Fixierung und Permeabilisierung; eine Methanolfixierung kann die nukleären RB-Epitope besser erhalten. Für ELISA kann das rekombinante Immunogen als Positivkontrolle dienen.
• Da es sich um einen in Kaninchen erzeugten polyklonalen Antikörper handelt, kann die Chargenkonsistenz variieren. Führen Sie geeignete Kontrollen durch und validieren Sie jede neue Charge.

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