Anti-RASSF1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q9NS23

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RASSF1-Funktion und -Lokalisierung

• RASSF1 ist ein potenzieller Tumorsuppressor, der für die Rezeptor-vermittelte Apoptose erforderlich ist. Er vermittelt die Aktivierung von STK3/MST2 und STK4/MST1 während der Fas-induzierten Apoptose, indem er deren Dephosphorylierung verhindert.
• Bei Assoziation mit MOAP1 fördert RASSF1 die Konformationsänderung von BAX und dessen Translokation zu mitochondrialen Membranen als Reaktion auf TNF- und TNFSF10-Stimulation.
• Isoform A interagiert mit CDC20, einem Aktivator des Anaphase-promoting complex (APC), hemmt die APC-Aktivität und den mitotischen Fortschritt. Es hemmt auch die Proliferation durch Regulation der Cyclin D1-Akkumulation am G1/S-Phasenübergang.
• Isoform A stört die MDM2-DAXX-USP7-Interaktion, fördert die Selbst-Ubiquitinierung von MDM2 und trägt zu einer effizienten TP53-Aktivierung bei der Kontrolle des Zellzyklus-Checkpoints nach DNA-Schäden bei.
• Das Protein lokalisiert sich im Zytoplasma, Zytoskelett (einschließlich Mikrotubuli, Zentrosom, Spindel und Spindelpol) und im Zellkern.
• Die Isoformen A und C sind in allen getesteten Geweben ubiquitär exprimiert, Isoform A jedoch häufig in Krebszelllinien abwesend. Isoform B wird hauptsächlich in hämatopoetischen Zellen exprimiert.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, Methylierung und Phosphorylierung. Das Protein enthält eine Zinkfingerdomäne und bindet Zink.
• Alternatives Spleißen und die Nutzung alternativer Promotoren erzeugen mehrere Isoformen, und das Gen ist in vielen Krebsarten epigenetischer Stille unterlegen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 101–340 von humanem RASSF1 (Isoform A) und umfasst kritische funktionelle Domänen. Erwägen Sie die Überprüfung der Isoformspezifität mithilfe von Positivkontrollen, die bekannte RASSF1-Varianten exprimieren.
• Für die Western Blot-Analyse sollten Ganzzelllysate aus humanen oder murinen Geweben/Zelllinien, die RASSF1 exprimieren, einen Band nahe 39 kDa ergeben. Beachten Sie, dass posttranslationale Modifikationen zu leichten Mobilitätsverschiebungen führen können.
• Im ELISA kann die Verwendung des rekombinanten Proteins oder Peptids, das aus der Immunogenregion abgeleitet wurde, als Beschichtungsantigen helfen, die Antikörpererkennung zu bestätigen. Validieren Sie die Assay-Bedingungen mit geeigneten Positiv- und Negativkontrollen.
• Da RASSF1 in Krebs häufig durch Promotormethylierung stummgeschaltet wird, kann eine Behandlung mit demethylierenden Agenzien (z. B. 5-Aza-2'-Desoxycytidin) vor der Lysatherstellung für die Detektion in bestimmten Zelllinien erforderlich sein.
• Dieser Antikörper wurde gezeigt, mit humanen und murinen Proben zu reagieren; die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies sollte empirisch bestimmt werden.

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