Anti-RALGPS1-Kaninchen-Polyklonalantikörper für WB und ELISA – Q5JS13

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RALGPS1

• Kodiert einen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor (GEF), der die kleine GTPase RALA spezifisch aktiviert, indem er den Austausch von GDP gegen GTP katalysiert und dadurch nachgeschaltete Signalkaskaden reguliert.
• Auch als RalGEF2 und RalGPS1A bekannt; das Protein enthält eine PH-Domäne und ein SH3-Bindungsmotiv, die charakteristisch für Mitglieder der RalGEF-Familie sind und die Membranadressierung sowie Protein-Protein-Interaktionen erleichtern.
• Das RALGPS1-Gen unterliegt alternativem Spleißen und erzeugt mindestens zwei wichtige Isoformen mit unterschiedlichen Gewebeverteilungsmustern.
• Isoform 1 wird vorwiegend im Herzen und in den Hoden exprimiert, mit geringeren Mengen im Gehirn, in der Bauchspeicheldrüse, der Skelettmuskulatur, dem Dünndarm und dem Thymus; Isoform 2 wird breiter im Gehirn, im Kolon, in der Niere, der Bauchspeicheldrüse, der Prostata, der Skelettmuskulatur, dem Dünndarm, den Hoden, dem Thymus und dem Uterus exprimiert.
• Studien zur subzellulären Lokalisation zeigen, dass RALGPS1 sowohl im Zytoplasma als auch an der Zellmembran vorkommt, was mit seiner Rolle bei der räumlichen Regulation der RALA-Signalübertragung übereinstimmt.
• Ist vermutlich an der Organisation des Zytoskeletts beteiligt, was auf eine Funktion bei der Zellform, Zellbeweglichkeit oder dem intrazellulären Transport hindeutet (aufgrund von Ähnlichkeiten).
• Strukturelle Studien (3D-Struktur) haben Einblicke in den katalytischen Mechanismus der Sec7-Domäne geliefert und deren Bedeutung als Guanin-Nukleotid-freisetzender Faktor unterstrichen.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 1–300 des humanen RALGPS1 (NP_055451.1), eine Region, die über verschiedene Isoformen hinweg konserviert sein kann; daher kann der Antikörper mehrere Spleißvarianten nachweisen. Zur Bestätigung der Spezifität sollten Sie eine Peptidblockierung oder isoformspezifische Kontrollen in Betracht ziehen.
• Im Western Blot wandert endogenes RALGPS1 bei ungefähr 62 kDa. Stellen Sie eine gründliche Zelllyse sicher und ziehen Sie Protokolle zur Anreicherung von Membranproteinen in Betracht, da das Protein mit der Plasmamembran assoziiert ist.
• Verwenden Sie bei der Durchführung eines ELISA eine mit dem rekombinanten Immunogenfragment erstellte Standardkurve zur quantitativen Schätzung und validieren Sie den Test anhand von Lysaten humaner Zellen oder Gewebe.
• Aufgrund der breiten Gewebeexpression sollte der Antikörper in einem Panel humaner Gewebe (z. B. Herz, Hoden, Gehirn) validiert werden, um das erwartete Bandenmuster zu bestätigen.
• Da RALGPS1 ein GEF ist, können Ko-Immunpräzipitationsexperimente mit WB kombiniert werden, um seine Interaktion mit RALA zu untersuchen; eine empirische Optimierung der Lysepuffer wird jedoch empfohlen.

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