Anti-RAG1 Kaninchen polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P15918

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RAG1

• RAG1 (Rekombinationsaktivierendes Protein 1, auch bekannt als RAG-1 und RNF74) ist die katalytische Komponente des RAG-Komplexes, die für die V(D)J-Rekombination essenziell ist. Diese Prozess baut die unterschiedlichen Immunglobulin- und T-Zell-Rezeptorgene in sich entwickelnden Lymphozyten auf.
• Es bindet direkt an konservierte Rekombinationssignalsequenzen (RSS) und katalysiert ortsspezifische DNA-Doppelstrangbrüche über einen zweistufigen Mechanismus: zunächst Nicking oberhalb des Heptamers, gefolgt von Haarnadelbildung durch Transesterifizierung, wobei stumpfe Signalenenden und haarnadelförmige Codierungsenden entstehen. RAG2 ist für alle katalytischen Aktivitäten erforderlich.
• Über die Endonukleaseaktivität hinaus fungiert RAG1 als E3-Ubiquitin-Protein-Ligase, die Histon H3 an unbekannten Stellen monoubiquitiert – eine Modifikation, die für den Verbindungsschritt der V(D)J-Rekombination erforderlich ist. Zusätzlich stimuliert die Trimethylierung von H3 an Lys-4 (H3K4me3) beide Spaltungsschritte.
• RAG1 lokalisiert im Zellkern, wo es mit Chromatin interagiert, um Rekombinationsereignisse zu vermitteln.
• Seine Expression ist auf reifende lymphoide Zellen beschränkt, was mit seiner Rolle bei der Lymphozytenentwicklung übereinstimmt.
• RAG1 ist auch an der allelischen Exklusion von Prä-B-Zellen beteiligt, indem es eine ATM-abhängige Neupositionierung eines Immunglobulin-Allels in das perizentromerische Heterochromatin induziert. Dies verhindert die Rekombination des zweiten Allels und gewährleistet die Klonalität.
• Das Protein unterliegt alternativem Spleißen, und seine multifunktionelle Natur wird durch Schlagworte wie DNA-bindend, Endonuklease, Hydrolase, metallbindend (Zinkfinger), Transferase, Ubl-Konjugation und Krankheitsvarianten im Zusammenhang mit schwerer kombinierter Immundefizienz (SCID) unterstrichen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die N-terminale Region (Aminosäuren 1-270) des menschlichen RAG1, die die DNA-bindende Domäne enthält. Diese Region kann mehrere Isoformen erkennen, die durch alternatives Spleißen entstehen.
• Für Western Blotting beträgt das vorausgesagte Molekulargewicht ~119 kDa. Verwenden Sie für hochmolekulare Proteine ein 6-8%iges SDS-PAGE-Gel und verlängerte Transferzeiten.
• Bei ELISA-Protokollen kann rekombinantes RAG1-Protein oder eine Peptidbeschichtung verwendet werden; validieren Sie die Assaybedingungen in Ihrer Probenmatrix, um Spezifität zu gewährleisten.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus ist zu erwarten; validieren Sie die Leistung in Maus-Lymphoidgeweben oder Zelllinien, wenn Sie in diesen Systemen arbeiten.
• Proteinextrakte aus menschlichen oder murinen lymphoiden Zelllinien (z. B. Jurkat, Raji, EL4) eignen sich wahrscheinlich als positive Kontrollen; nicht-lymphoide Zelllinien können als negative Kontrollen dienen.

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