Anti-Raf1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P04049

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Raf1-Funktion und Lokalisierung

• RAF1 (auch bekannt als c-Raf, Raf-1) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die als kritische Verbindung zwischen membrangebundenen Ras-GTPasen und der MAPK/ERK-Kaskade dient und Zellproliferation, -differenzierung, Apoptose und Überleben reguliert.
• Die Aktivierung von RAF1 initiiert eine Phosphorylierungskaskade über MEK1/2 und ERK1/2, die letztendlich die Transkription von Genen steuert, die am Zellzyklusfortschritt und an der Transformation beteiligt sind.
• RAF1 phosphoryliert mehrere Downstream-Ziele, darunter BAD (an Ser-75), Adenylylcyclasen (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A, TNNT2, und moduliert die NF-kB-Signalgebung, Motilität, Apoptose, Proliferation und Angiogenese.
• Subzelluläre Lokalisierung: RAF1 befindet sich im Zytoplasma, der Zellmembran, dem Mitochondrium und dem Zellkern, wobei die Translokation zum Mitochondrium über BCL2-Bindung antiapoptotische Effekte vermittelt.
• Gewebespezifität: Im Skelettmuskel ist Isoform 1 häufiger als Isoform 2.
• Posttranslationale Modifikationen: RAF1 wird an Ser-338 und Ser-339 durch PAK1 phosphoryliert und unterliegt Methylierung, Metallbindung (Zink) und alternativem Spleißen, was zu mehreren Isoformen führt.
• Assoziiert mit Krankheiten: Mutationen und Fehlregulation von RAF1 werden mit Kardiomyopathien (CMD1NN) und Taubheit in Verbindung gebracht, was seine Rolle in verschiedenen physiologischen Prozessen unterstreicht.
• Wichtige biologische Rollen: Wirkt als Proto-Onkogen, reguliert Wundheilung, Transformation von Epithelzellen und Unterdrückung der Apoptose.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot detektiert der Antikörper ein Band bei ~73 kDa. Positive Kontrollen wie HeLa-, HEK293- oder Jurkat-Zelllysate werden empfohlen.
• Bei der Immunhistochemie kann eine Antigen-Demaskierung erforderlich sein; erwägen Sie, sowohl hitzeinduzierte als auch enzymatische Methoden an Paraffin-eingebetteten Geweben zu testen.
• Für Immunfluoreszenz fügen Sie eine Permeabilisierung mit Triton X-100 hinzu und verwenden Sie geeignete sekundäre Antikörper; beachten Sie, dass Raf1 im Zytoplasma, der Membran und dem Zellkern lokalisiert ist.
• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 190-350, die mehrere Raf1-Isoformen erkennen können; eine Validierung in relevanten Spezies (Human, Maus, Ratte) wird empfohlen.
• Als polyklonaler Antikörper kann es von Charge zu Charge zu Variabilität kommen; überprüfen Sie die Leistung im vorgesehenen Assay mit geeigneten Kontrollen.

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