Anti-RACK1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P63244

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RACK1-Funktion und -Lokalisierung

• RACK1 (Rezeptor für aktivierte C-Kinase 1), auch bekannt als GNB2L1, HLC-7 oder PIG21, ist ein Gerüstprotein und ein integraler Bestandteil der ribosomalen 40S-Untereinheit. Es enthält mehrere WD-Wiederholungsdomänen, die diverse Protein-Protein-Interaktionen vermitteln.
• Als Teil des Ribosoms ist RACK1 an der translativen Repression beteiligt (PubMed:23636399) und initiiert die Ribosom-Qualitätskontrolle (RQC), indem es die Ubiquitinierung von 40S-Untereinheiten während einer gestoppten Translation fördert (PubMed:28132843). Verwandte Referenzen: PMID:23636399 PMID:28132843
• Es bindet und stabilisiert die aktivierte Proteinkinase C (PKC), verstärkt die PKC-vermittelte Phosphorylierung und kann PKC zum Ribosom rekrutieren, um EIF6 zu phosphorylieren und so die Translation zu regulieren.
• RACK1 moduliert eine breite Palette von Signalwegen und zellulären Prozessen, einschließlich des Zellzyklusfortschritts (verlängert die G0/G1-Phase), Apoptose (fördert die BAX-Oligomerisierung), Integrin-Signalisierung und Hemmung des Wnt-Signalwegs.
• Subzellulär kommt RACK1 im Zytoplasma, der Zellmembran, dem Zellkern, der perinukleären Region, den Dendriten und den phagozytären Bechern vor, was seine multifunktionalen Rollen widerspiegelt.
• In der Leber wird RACK1 in aktivierten hepatischen Sternzellen auf höherem Niveau exprimiert als in Hepatozyten oder Kupffer-Zellen und ist in hepatozellulären Karzinomen hochreguliert, was auf eine Beteiligung an hepatischer Fibrose und Krebs hindeutet.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung und Acetylierung. RACK1 nimmt auch an Wirt-Virus-Interaktionen teil, wie z. B. der Verstärkung der HIV-1-Nef-Phosphorylierung und dem Umbau von Ribosomen für die Translation von Pockenvirus-mRNA.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 30–290 von humanem RACK1 und deckt den Großteil des Proteins ab, einschließlich mehrerer WD-Wiederholungen. Dieses Design soll Antikörper erzeugen, die sowohl native als auch denaturierte Konformationen erkennen.
• Für Western Blots beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht ca. 35 kDa. Verwenden Sie geeignete SDS-PAGE-Bedingungen und schließen Sie eine geeignete Ladekontrolle ein.
• In IF/ICC-Experimenten zeigt RACK1 eine zytoplasmische, membranöse und nukleäre Lokalisierung. Optimieren Sie die Permeabilisierungs- und Fixierungsbedingungen, um alle Pools zu detektieren.
• Bei der Durchführung von ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden. Validieren Sie seine Leistung mit gereinigtem RACK1-Protein oder relevanten Zelllysaten in Ihrem Assay-Setup.
• Der Antikörper kreuzreagiert mit Maus- und Ratten-RACK1, was ihn für Studien an Nagetiermodellen geeignet macht. Bestätigen Sie die speziespezifische Reaktivität in Ihrem experimentellen System.

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