Anti-RABGAP1 polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – Q9Y3P9

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RABGAP1

• RABGAP1, auch bekannt als Rab-GTPase-aktivierendes Protein 1, GAPCenA (GAP- und zentrosomassoziiertes Protein) oder TBC1D11, wirkt als GTPase-aktivierendes Protein (GAP) für RAB6A und fördert die GTP-Hydrolyse zur Regulation des Rab-vermittelten Transports und der Signalübertragung.
• Es spielt eine Rolle bei der Mikrotubulus-Nukleation am Zentrosom und ist am Übergang von der Metaphase zur Anaphase während der Zellteilung beteiligt, wodurch Membrantransport und Zellzykluskontrolle miteinander verknüpft werden.
• RABGAP1 enthält eine für RabGAPs charakteristische TBC-Domäne (Tre-2/Bub2/Cdc16) sowie coiled-coil-Regionen, die Protein-Protein-Interaktionen und die Zentrosomen-Zielsteuerung erleichtern können.
• Die Lokalisation ist überwiegend zytoplasmatisch, mit einer Anreicherung am Zentrosom und im Zytosol, wie durch subzelluläre Fraktionierung und Immunfluoreszenzstudien gezeigt wurde.
• Das Protein unterliegt alternativem Spleißen, wodurch mehrere Isoformen entstehen, und wird durch Phosphorylierung reguliert, wie Proteomikdaten und das Vorhandensein von Phosphorylierungsstellen in Datenbanken belegen.
• Das Molekulargewicht beträgt etwa 122 kDa (berechnet etwa 121,7 kDa); der Antikörper erkennt bei Western-Blot-Analysen geeigneter Lysate eine Bande in der Nähe dieser Größe.
• RABGAP1 wurde in Hochdurchsatz-Proteomik-Screenings identifiziert, was seine Expression in menschlichen Geweben und seine Verbindung mit dem Zentrosomen-Proteom bestätigt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen wurde gegen eine C-terminale Region (AS 830–1069) des humanen RABGAP1 entwickelt, die sich über einen Teil der coiled-coil-Domäne erstreckt und möglicherweise für die GAP-Aktivität wichtige Regionen umfasst; daher kann der Antikörper funktionelle Epitope erkennen.
• Für Western Blotting sollten Standardbedingungen mit reduzierenden Agenzien verwendet und 20–50 µg Gesamtzelllysat aufgetragen werden; die vorhergesagte Bande liegt bei 122 kDa, und die Kreuzreaktivität mit der Maus ermöglicht Analysen in gängigen Zelllinien wie NIH/3T3 oder MEFs.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) wird eine Antigen-Retrieval-Behandlung mit Citrat- oder EDTA-Puffer empfohlen; optimieren Sie die Antikörperverdünnung (z. B. 1:50–1:200) und verwenden Sie geeignete Negativkontrollen, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für ELISA kann der Antikörper als Fang- oder Detektionsreagenz eingesetzt werden; zur Bestimmung der optimalen Beschichtungs- und Antikörperkonzentrationen werden vorläufige Schachbrett-Titrationen empfohlen.
• Da RABGAP1 ein Protein geringer Abundanz ist, das an der Zellzyklusregulation beteiligt ist, sollte bei der Untersuchung der Zentrosomenlokalisation oder von zellzyklusabhängigen Expressionsänderungen eine Synchronisierung der Zellen in Betracht gezogen werden, um Zellen in der Metaphase anzureichern.

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