Anti-PUS10 polyklonaler Antikörper für WB und ELISA – Q3MIT2

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PUS10

• PUS10 (auch bekannt als DOBI, Hup10, CCDC139) ist ein multifunktionales Protein, das im Zytoplasma als tRNA-Pseudouridylat-Synthase fungiert und im Zellkern an der Verarbeitung von pri-miRNAs beteiligt ist, wobei seine jeweiligen Funktionen von seiner subzellulären Lokalisation abhängen. Zugehörige Referenzen: PMID:31819270 PMID:33023933
• Im Zytoplasma katalysiert PUS10 die Umwandlung von Uracil in Pseudouridin an den Positionen 54 und 55 in der Ψ-GC-Schleife einer Untergruppe von tRNAs – eine für die Struktur und Funktion der tRNA entscheidende Modifikation. Zugehörige Referenzen: PMID:30530625 PMID:31819270 PMID:33023933
• Die Pseudouridylierungsaktivität von PUS10 wird durch das Vorhandensein von 1-Methyladenosin an den Positionen 53–61 der Ziel-tRNA verstärkt, was auf einen kontextabhängigen Regulationsmechanismus hinweist. Zugehörige Referenzen: PMID:30530625
• Im Zellkern bindet PUS10 an primäre microRNAs (pri-miRNAs) und fördert deren Verarbeitung unabhängig von seiner Pseudouridylat-Synthase-Aktivität, was auf eine nicht-katalytische Rolle bei der miRNA-Biogenese hinweist. Zugehörige Referenzen: PMID:31819270
• PUS10 moduliert die durch TRAIL/TNFSF10 induzierte Apoptose, indem es Procaspase-8 aktiviert und die BID-Spaltung fördert, und ist für das Fortschreiten im intrinsischen mitochondrialen Zelltodweg erforderlich. Zugehörige Referenzen: PMID:14527409 PMID:19712588
• Auf subzellulärer Ebene ist PUS10 im Zellkern, im Zytoplasma und in den Mitochondrien lokalisiert, was mit seinen vielfältigen Funktionen bei der RNA-Verarbeitung und der Signalübertragung des Zelltods übereinstimmt.
• Das Protein enthält Coiled-Coil-Domänen und ist mit Schlüsselbegriffen wie Isomerase-Aktivität, Metallbindung, Zink, Phosphoprotein und tRNA-Verarbeitung annotiert, was seine strukturellen und enzymatischen Eigenschaften widerspiegelt.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das für diesen Antikörper verwendete Immunogen (ein rekombinantes Fusionsprotein, das sich über die Aminosäuren 290–529 erstreckt) deckt die C-terminale Region von PUS10 ab, was für den Nachweis sowohl vollständiger als auch verkürzter Formen nützlich sein kann. Es sollte überprüft werden, ob das gewünschte Isoform im relevanten Probensystem nachgewiesen wird.
• Für Western Blotting beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 60 kDa, jedoch können posttranslationale Modifikationen oder eine subzelluläre Prozessierung zu geringfügigen Verschiebungen der Banden führen. Eine Validierung im spezifischen Zell- oder Gewebelysat wird empfohlen.
• ELISA-Anwendungen können optimiert werden, indem der Antikörper mit rekombinantem PUS10 oder Peptidfragmenten verwendet wird. Die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte deutet auf eine Eignung für vergleichende Studien hin; dennoch werden eine experimentelle Titration und geeignete Kontrollen empfohlen.
• Da sich die Funktionen von PUS10 zwischen Zellkern und Zytoplasma unterscheiden, können Fraktionierungsassays oder Immunfluoreszenz bei der Untersuchung der subzellulären Lokalisation aufschlussreich sein. Es ist zu beachten, dass dieser Antikörper nicht für IF oder IHC validiert wurde und eine unabhängige Prüfung erfordern würde.

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