Kaninchen-polyklonaler Anti-Pumilio-1-Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – Q14671

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Pumilio 1

• Pumilio-Homolog 1 (PUM1) ist ein sequenzspezifisches RNA-bindendes Protein, das als posttranskriptioneller Repressor wirkt, indem es über die Konsensussequenz des Pumilio-Response-Elements (PRE) 5'-UGUANAUA-3' an die 3'-UTR von Ziel-mRNAs bindet. Verwandte Referenzen: PMID:18328718, PMID:21397187, PMID:21572425

• PUM1 vermittelt die Repression durch zwei Mechanismen: die direkte Rekrutierung des CCR4-POP2-NOT-Deadenylasekomplexes, was zu einer Hemmung der Translation und zum Abbau von mRNA führt, sowie die Förderung der Zugänglichkeit von miRNA für eine Deadenylierungs-unabhängige Repression. Verwandte Referenzen: PMID:22955276, PMID:18776931, PMID:20818387, PMID:20860814

• Nach der Stimulation durch Wachstumsfaktoren wird PUM1 phosphoryliert und bindet an die 3'-UTR der CDKN1B/p27-mRNA, wodurch eine Konformationsänderung ausgelöst wird, die miRNA-Bindungsstellen für miR-221 und miR-222 freilegt. Dies führt zu einer effizienten Unterdrückung von CDKN1B/p27 und einem schnellen Eintritt in den Zellzyklus. Verwandte Referenzen: PMID:20818387

• PUM1 unterdrückt ein für die genomische Stabilität essenzielles Genprogramm, einschließlich mitotischer Faktoren sowie Faktoren der DNA-Reparatur und DNA-Replikation. Diese Aktivität wird durch die lncRNA NORAD antagonisiert, die PUM1 im Zytoplasma sequestriert. Verwandte Referenzen: PMID:26724866

• In Neuronen reguliert PUM1 die ATXN1-mRNA-Spiegel, indem es an deren 3'-UTR bindet und Transkripte unabhängig von der miRNA-Maschinerie herunterreguliert, was für die spinocerebelläre Ataxie von Bedeutung ist. Verwandte Referenzen: PMID:25768905, PMID:29474920

• PUM1 ist im Zytoplasma, in P-Bodies und zytoplasmatischen Granula lokalisiert und wird breit in Geweben wie Gehirn, Herz, Niere, Muskel, Darm und Magen exprimiert, fehlt jedoch in bestimmten Hirnregionen wie Kleinhirn, Corpus callosum und Hippocampus.

• PUM1 spielt eine Rolle bei der zytoplasmatischen Viruserkennung, der Spermatogenese und der Erneuerung embryonaler Stammzellen, indem es mRNAs zur posttranskriptionellen Regulation ansteuert, und steht mit krankheitsassoziierten Varianten in Zusammenhang, die mit Epilepsie, geistiger Behinderung und Neurodegeneration verbunden sind. Verwandte Referenzen: PMID:25340845

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Der Immunogen entspricht den Aminosäuren 1–130 des humanen Pumilio 1 und zielt auf die N-terminale Region ab. Diese Region kann über verschiedene Spezies hinweg konserviert sein, was die beobachtete Kreuzreaktivität mit Maus unterstützt.
• Für das Western Blotting beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 126 kDa. Verwenden Sie einen geeigneten Gelanteil und geeignete Transferbedingungen für Proteine mit hohem Molekulargewicht und erwägen Sie verlängerte Blockierungs- und Waschschritte, um den Hintergrund zu reduzieren.
• Bei Immunfluoreszenz/ICC sollte die zytoplasmatische und granuläre Lokalisation von PUM1 unter geeigneten Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen untersucht werden. Validieren Sie das Färbemuster bei Bedarf anhand bekannter Marker für P-Bodies oder Stressgranula.
• Für ELISA-Anwendungen kann das rekombinante Protein-Immunogen als Positivkontrolle dienen. Titrieren Sie den Antikörper, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu optimieren.
• Als polyklonaler Antikörper kann eine Chargen-zu-Chargen-Variabilität auftreten. Wir empfehlen, jede neue Charge in Ihrem spezifischen Assaysystem zu validieren.

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