Anti-PSMD14 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - O00487

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PSMD14-Funktion und Lokalisierung

• PSMD14, auch bekannt als POH1 oder RPN11, ist eine Komponente der regulatorischen Untereinheit des 26S-Proteasoms, eines großen Multiproteinkomplexes, der für den ATP-abhängigen Abbau ubiquitinylierter Proteine verantwortlich ist. Dies ist entscheidend für die Proteinhomöostase, den Zellzyklusfortschritt, die Apoptose und die DNA-Reparatur. Verwandte Referenzen: PMID:9374539 PMID:1317798

• Es fungiert als Metalloprotease, die spezifisch 'Lys-63'-verknüpfte Polyubiquitinketten innerhalb des 26S-Proteasoms spaltet. Dies ist eine kritische deubiquitinierende Aktivität, die für die Substratverarbeitung und das Recycling von Ubiquitin erforderlich ist. Verwandte Referenzen: PMID:22909820

• Bei der DNA-Schadensreparatur fördert PSMD14 das nicht-homologe Endverknüpfen (NHEJ), indem es Lys-63-verknüpftes Polyubiquitin entfernt. Dies erleichtert die Chromatin-Retention von JMJD2A/KDM4A und begrenzt die TP53BP1-Akkumulation; es verbessert auch die homologe Rekombination, indem es das RAD51-Laden unterstützt. Verwandte Referenzen: PMID:22909820

• Darüber hinaus reguliert PSMD14 die Makroautophagie, indem es durch seine deubiquitinierende Aktivität den retrograden Transport vom Golgi zum ER sicherstellt. Dies verhindert die Fehllokalisierung essentieller Autophagieproteine und ermöglicht die korrekte Bildung von Autophagosomen. Verwandte Referenzen: PMID:32210007

• Das Protein ist weit verbreitet exprimiert, mit den höchsten Konzentrationen im Herzen und in der Skelettmuskulatur, was seine essentielle Haushaltsfunktion widerspiegelt.

• Zu den wichtigsten strukturellen und funktionellen Merkmalen gehören seine Metalloprotease-Domäne mit Zinkbindung und seine Klassifizierung als Thiolprotease; es ist außerdem ein Phosphoprotein und Teil des Ubiquitin-Konjugationswegs.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das verwendete Immunogen entspricht den Aminosäuren 160-300 von humanem PSMD14, einer Region, von der vorhergesagt wird, dass sie exponiert und über Spezies hinweg konserviert ist. Dies könnte zur Kreuzreaktivität des Antikörpers mit Maus und Ratte beitragen.
• Für den Western Blot (WB) ist das erwartete Band bei ~35kDa; ziehen Sie geeignete Ladekontrollen in Betracht und validieren Sie das Signal mit siRNA- oder Knockout-Lysaten, um die Spezifität zu bestätigen.
• Bei Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC) sollten negative Kontrollen (z.B. nur sekundärer Antikörper) eingeschlossen und die Lokalisierung mit Organellenmarkern überprüft werden, da PSMD14 mit dem Proteasom sowohl in zytoplasmatischen als auch in nukleären Kompartimenten assoziiert ist.
• Für ELISA sollten Titrationsexperimente durchgeführt werden, um die optimale Beschichtungsantigen- und Antikörperkonzentration zu bestimmen; die Leistung des Antikörpers sollte in der relevanten Probenmatrix validiert werden.

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