Anti-PSAP (Prosaposin)-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA – P07602

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PSAP (Prosaposin)

• Prosaposin (PSAP) ist ein 524 Aminosäuren umfassendes Vorläuferglykoprotein, das in Lysosomen proteolytisch verarbeitet wird und vier homologe Saposin-Peptide (Saposin A, B, C und D) bildet, die als essenzielle nichtenzymatische Aktivatorproteine für Sphingolipid-Hydrolasen dienen.
• Saposine erleichtern den Abbau von Glykosphingolipiden, indem sie Lipidsubstrate aus Membrandoppelschichten extrahieren und sie ihren jeweiligen Enzymen präsentieren; Saposin B aktiviert Arylsulfatase A, Beta-Galaktosidase und Alpha-Galaktosidase A, während Saposin C die Glukozerebrosidase und Saposin D die saure Ceramidase aktiviert.
• Neben seiner Funktion als lysosomaler Kofaktor weist das vollständige Prosaposin neurotrophe und myelinotrophe Funktionen auf, indem es über die G-Protein-gekoppelten Rezeptoren GPR37 und GPR37L1 signalisiert und dadurch das Überleben von Neuronen sowie die Myelinisierung fördert.
• PSAP wird breit exprimiert, mit hohen Konzentrationen im Gehirn, in der Niere und in der Leber, und befindet sich hauptsächlich im lysosomalen Lumen; es wird zudem sezerniert und in extrazellulären Flüssigkeiten wie Liquor und Milch nachgewiesen.
• Mutationen in PSAP stehen mit verschiedenen lysosomalen Speicherkrankheiten in Zusammenhang, darunter Morbus Gaucher, metachromatische Leukodystrophie und Morbus Krabbe, sowie mit komplexen Formen mit kombinierten Saposin-Defizienzen; Polymorphismen wurden außerdem mit dem Risiko für Parkinson in Verbindung gebracht.
• Das Protein enthält mehrere intrakettäre Disulfidbrücken und N-glykosylierte Stellen, die für seine Stabilität, Verarbeitung und funktionelle Aktivierung entscheidend sind. Der kanonische Prosaposin-Vorläufer hat eine berechnete Molekülmasse von 58,1 kDa; die umfangreiche Glykosylierung führt bei der SDS-PAGE häufig zu Banden bei 65–70 kDa.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Resten 275–524 des humanen PSAP und umfasst die Saposin-C- und -D-Domänen sowie den C-terminalen Linker; der resultierende polyklonale Antikörper sollte sowohl den vollständigen Vorläufer als auch möglicherweise verarbeitete Saposin-C/D-Fragmente erkennen.
• Für den Western Blot wird eine Standard-SDS-PAGE unter reduzierenden Bedingungen empfohlen; in Lysaten aus humanem, Maus- und Rattengewebe wird häufig eine vorherrschende Bande bei ca. 58 kDa beobachtet, die dem Prosaposin-Vorläufer entspricht. Zusätzliche Banden mit niedrigerem Molekulargewicht können durch proteolytische Verarbeitung entstehen.
• Bei der Immunfluoreszenz ist eine Permeabilisierung erforderlich, um die lysosomale Lokalisation zugänglich zu machen; für Kolokalisationsstudien wird eine Doppel- oder Mehrfachfärbung mit einem lysosomalen Marker (z. B. LAMP1) empfohlen.
• Bei der Immunhistochemie an in Paraffin eingebetteten Schnitten verbessert eine Antigenrückgewinnung mit Citratpuffer (pH 6,0) häufig das Signal; als positive Kontrollgewebe eignen sich Gehirn (Kleinhirn, Hippocampus) und Niere.
• Dieser Antikörper kann im ELISA als Einfang- oder Detektionsreagenz eingesetzt werden, wenn er mit einem geeigneten monoklonalen Anti-PSAP-Antikörper kombiniert wird; optimale Verdünnungen und Testbedingungen müssen empirisch bestimmt werden.

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