Anti-PPP4C-Kaninchen-polykolonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P60510

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von PPP4C

• PPP4C kodiert die katalytische Untereinheit der Serin/Threonin-Proteinphosphatase 4 (PP4), die auch als Proteinphosphatase X (PP-X) bezeichnet wird.
• PP4 ist eine ubiquitär vorkommende Phosphatase, die an zahlreichen zellulären Prozessen beteiligt ist, darunter die Organisation von Mikrotubuli an Zentrosomen, die Reifung von spliceosomalen snRNPs, Apoptose, DNA-Reparatur, TNF-alpha-Signalübertragung, JNK-Aktivierung, die Regulation der Histonacetylierung, die Signalübertragung an DNA-Schadens-Checkpoints, die Aktivierung von NF-kappa-B und die Zellmigration.
• PP4 bildet mit regulatorischen Untereinheiten wie PPP4R1, PPP4R2 und PPP4R3A unterschiedliche Komplexe, die die Substratspezifität bestimmen: Beispielsweise dephosphoryliert der PPP4C-PPP4R2-PPP4R3A-Komplex gamma-H2AX an DNA-Schadensstellen, während der PPP4C-PPP4R1-Komplex möglicherweise HDAC3 reguliert.
• Das Protein ist überwiegend im Zytoplasma und im Zellkern lokalisiert und weist eine Anreicherung am Zentrosom und am Mikrotubuli-organisierenden Zentrum auf, was mit seinen Funktionen bei der Regulation des Zytoskeletts und der Mitose übereinstimmt.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Acetylierung und Methylierung. Für seine Hydrolaseaktivität benötigt das Enzym Mangan als Kofaktor.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Fusionsprotein, das die Aminosäuren 1-307 des humanen PPP4C (NP_002711.1) umfasst und damit die vollständige katalytische Untereinheit repräsentiert. Aufgrund dieses Designs wird erwartet, dass polykolonale Antikörper gegen mehrere Epitope erzeugt werden.
• Bei der Western-Blot-Analyse wird eine Hauptbande nahe 35 kDa erwartet. Posttranslationale Modifikationen oder Komplexbildungen können jedoch zu zusätzlichen Banden führen. Eine Validierung im relevanten Probensystem wird empfohlen.
• Bei Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollte berücksichtigt werden, dass PPP4C sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern lokalisiert ist und eine Anreicherung am Zentrosom aufweist. Geeignete Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle sollten getestet werden.
• Für Immunpräzipitation (IP) und ELISA können Standardbedingungen verwendet werden. Da es sich um eine polyklonale Präparation handelt, kann eine Vernetzung mit Beads oder die Verwendung eines Brückenantikörpers die Effizienz der Bindung verbessern.
• Die Kreuzreaktivität mit Orthologen von Maus und Ratte wird unterstützt. Vor Hochdurchsatz-Assays werden jedoch ein Sequenzabgleich und eine vorläufige Bestätigung in der vorgesehenen Spezies empfohlen.

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