Anti-POLR2A Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IP, ELISA - P24928

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: POLR2A-Funktion und -Lokalisierung

• POLR2A kodiert die größte Untereinheit (RPB1) der DNA-gerichteten RNA-Polymerase II, das Enzym, das für die Synthese von mRNA-Vorstufen und vielen nicht-kodierenden RNAs in eukaryotischen Zellen verantwortlich ist.
• RPB1 bildet zusammen mit der zweitgrößten Untereinheit RPB2 den katalytischen Kern von Pol II. Es enthält ein konserviertes DxDGD-Motiv, das ein Mg²⁺-Ion koordiniert, das für die Nukleotidaddition während der RNA-Polymerisation essentiell ist. Verwandte Referenzen: PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• Das Enzym durchläuft die Zyklen der Transkriptionsinitiation, -elongation und -terminierung. Während der Initiation wird Pol II an Promotoren rekrutiert, die Elemente wie die TATA-Box oder CpG-Inseln enthalten. Verwandte Referenzen: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• RPB1 besitzt eine einzigartige C-terminale Domäne (CTD), die aus 52 Heptapeptid-Wiederholungen besteht. Die CTD unterliegt einer dynamischen Phosphorylierung (insbesondere an Ser-2 und Ser-5), um die Transkriptionsstufen zu koordinieren und Verarbeitungsfaktoren zu rekrutieren. Verwandte Referenzen: PMID:24207025, PMID:26124092
• Neben seiner DNA-abhängigen RNA-Polymerase-Aktivität kann POLR2A als RNA-abhängige RNA-Polymerase wirken, nicht-kodierende RNAs verlängern und die Replikation des Hepatitis-Delta-Virus vermitteln.
• Das Protein lokalisiert sich vorwiegend im Zellkern, wird aber auch im Zytoplasma gefunden und ist während der Mitose mit Chromosomen assoziiert.
• Mutationen in POLR2A sind mit neuroentwicklungsbedingten Störungen verbunden, einschließlich intellektueller Behinderung (NEDHIB), was seine wesentliche Rolle bei der Genexpression unterstreicht.
• Alternatives Spleißen und posttranslationale Modifikationen (Acetylierung, Methylierung, Ubiquitinierung, Phosphorylierung) diversifizieren die POLR2A-Funktion und -regulation weiter.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (aa 1-260) von humanem POLR2A, die außerhalb der repetitiven CTD liegt. Dieses Design kann eine Spezifität für den RPB1-Kern gegenüber der hochhomologen CTD bieten, die in einigen anderen Proteinen gefunden wird.
• Es wurde gezeigt, dass der Antikörper in WB, IF/ICC, IP und ELISA funktioniert. Führen Sie einen WB durch, beachten Sie das vorhergesagte Molekulargewicht von ~217 kDa; erwägen Sie die Verwendung eines SDS-PAGE-Gels mit niedrigem Prozentsatz und eine gründliche Optimierung des Transfers für ein so großes Protein.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte wurde berichtet, was darauf hindeutet, dass das Epitop über diese Spezies hinweg konserviert ist. Validieren Sie dies in Ihrem spezifischen Modellsystem, um es zu bestätigen.
• Für IF/ICC ist eine kern- und perinukleäre Färbung auf der Grundlage der POLR2A-Lokalisierung zu erwarten; der Hintergrund kann jedoch je nach Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen variieren.
• Bei IP-Experimenten stellen Sie sicher, dass der Lysepuffer mit der Extraktion von Kernproteinen kompatibel ist, um Pol-II-Komplexe effektiv zu solubilisieren.

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