Anti-PMS2 Kaninchen-Polyclonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IP, ELISA - P54278

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: PMS2 Funktion und Lokalisation

• PMS2 (PMS1-Proteinhomolog 2) ist ein Kernbestandteil des postreplikativen DNA-Fehlerpaarungsreparatur (MMR)-Systems, wo es mit MLH1 heterodimerisiert, um den MutL-Alpha-Komplex zu bilden. Verwandte Referenzen: PMID:30653781 PMID:35189042
• Die Rekrutierung von MutL-Alpha zur Fehlstelle wird durch MutS-Alpha (MSH2-MSH6) oder MutS-Beta (MSH2-MSH3) vermittelt, und die Assemblierung des ternären Komplexes mit RFC und PCNA aktiviert die latente Endonukleaseaktivität von PMS2, wodurch Einzelstrangbrüche in der Nähe der Fehlstelle eingeführt werden.
• Der Strangdiskriminierungsmechanismus beruht auf DNA-Methylierung: der neu synthetisierte, unmethylierte Strand wird bevorzugt geschnitten, was die Korrektur von Replikationsfehlern gewährleistet.
• Als Endonuklease erzeugt PMS2 Eintrittspunkte für die Exonuklease EXO1, die den fehlerhaltigen Strang entfernt, und es interagiert auch physikalisch mit den Klemmen-Lader-Untereinheiten der DNA-Polymerase III, was auf eine Rolle bei der Rekrutierung der replikativen Polymerase für die Reparatursynthese hindeutet.
• Über die MMR hinaus ist PMS2 an der DNA-Schadenssignalisierung beteiligt, es löst Zellzyklusarretierung oder Apoptose als Reaktion auf umfangreiche DNA-Läsionen aus und wirkt dadurch als Tumorsuppressor.
• PMS2 besitzt eine intrinsische ATPase-Aktivität; dennoch ist die ATP-Hydrolyse unter bestimmten Bedingungen möglicherweise nicht für eine funktionierende Fehlerpaarungsreparatur erforderlich. Verwandte Referenzen: PMID:35189042
• Das Protein lokalisiert ausschließlich im Zellkern und wird an mehreren Stellen phosphoryliert. Mutationen in PMS2 sind mit hereditärem nichtpolyposen kolorektalem Karzinom (Lynch-Syndrom) und anderen Malignitäten assoziiert.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 390–670 im C-terminalen Bereich von menschlichem PMS2, der die aktive Endonuklease-Stelle enthält; erwägen Sie die Validierung der Reaktivität in Proben, die volllängige oder verkürzte PMS2-Varianten exprimieren.
• Für Western Blot (WB) erwarten Sie eine Bande bei etwa 96 kDa; verwenden Sie eine Positivkontrolle wie HeLa- oder HEK293-Zelllysate und fügen Sie Kernextrakte hinzu, um das Signal zu verstärken.
• Bei Immunfluoreszenz (IF/ICC) zeigt PMS2 ein Kernfärbemuster; eine Co-Färbung mit einem Kernmarker wird empfohlen, um die Lokalisation zu bestätigen.
• Für die Immunpräzipitation (IP) kann der Antikörper den MutL-Alpha-Komplex (MLH1-PMS2) ausfällen; validieren Sie die Co-Präzipitation in den entsprechenden Zelllinien.
• Kreuzreaktivität mit murine PMS2 ist nachgewiesen; für Mausstudien überprüfen Sie die Leistung in der vorgesehenen Gewebe- oder Zellart.
• Optimieren Sie die Antikörperverdünnungen für jede Anwendung und jedes Probensystem, da die Reaktivität je nach Expressionsniveau und posttranslationalen Modifikationen variieren kann.

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