Anti-PMEL (gp100) Monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P40967

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: PMEL-Funktion und Lokalisierung

• Das Melanozyten-Protein PMEL (auch bekannt als gp100, HMB-45 oder SILV) ist ein Prämelanosom-Protein, das eine zentrale Rolle bei der Melanosom-Morphogenese und Pigmentierung spielt.
• Während der Melanosom-Reifung assemblen verarbeitete amyloidogene Fragmente von PMEL zu parallelen fibrillären Blättern, was die Verlängerung von Prämelanosomen im Stadium I zu gestreiften ellipsoiden Melanosomen im Stadium II antreibt.
• In pigmentierten Melanosomen der Stadien III und IV dient die Amyloid-Matrix als Plattform zur Anreicherung von Eumelanin-Vorstufen, was eine effiziente Melanin-Synthese erleichtert und gleichzeitig potenziell toxische Reaktionszwischenprodukte sequestriert.
• PMEL ist ein gut charakterisiertes melanomspezifisches Antigen; immunodominante Peptide, die von PMEL stammen, wie G9-154 (KTWGQYWQV) und G9-209 (ITDQVPFSV), werden von HLA-A-Molekülen präsentiert und stimulieren anti-tumorale zytotoxische T-Zell-Antworten.
• Subzellulär lokalisiert PMEL an der Membran des endoplasmatischen Retikulums, dem Golgi-Apparat, der Membran des cis-Golgi-Netzwerks, Endosomen (multivesikuläre Körper) und Melanosomen und findet sich auch in extrazellulären Vesikeln und sezernierten Formen.
• Das Protein unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Spaltung an Paaren basischer Reste, Disulfidbrückenbildung, Glykosylierung und Sialinsäureanlagerung.
• Normalerweise wird PMEL in ruhenden adulten Melanozyten auf niedrigem Niveau exprimiert, ist aber in proliferierenden neonatalen Melanozyten und während des Tumorwachstums, insbesondere bei Melanomen und einigen dysplastischen Nävi, überexprimiert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (aa 25-211) des humanen PMEL, die vorhergesagt extrazellulär/luminal ist; berücksichtigen Sie dies bei der Gestaltung von Nachweisstrategien oder der Kombination mit anderen Antikörpern.
• Für Western Blot wandert das volle, unverarbeitete PMEL bei ca. 70 kDa, beachten Sie jedoch, dass endogenes PMEL proteolytisch in mehrere Fragmente verarbeitet wird; validieren Sie das erwartete Bandmuster in Ihren Lysaten.
• In der Immunhistochemie (Paraffin) sollte die PMEL-Färbung in Melanozyten und Melanomzellen membranös/zytoplasmisch sein; fügen Sie geeignete positive (Melanomgewebe) und negative Kontrollen ein.
• Für ELISA-Anwendungen verwenden Sie rekombinantes PMEL-Protein oder synthetische Peptide als Beschichtungsantigene und titrieren Sie den Antikörper sorgfältig, um ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis zu erzielen.
• Da die PMEL-Expression mit dem Aktivierungszustand der Melanozyten variieren kann, erwägen Sie die Verwendung bekannter Melanom-Zelllinien (z. B. SK-MEL-28) oder primärer Melanozyten als positive Kontrollen.

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