Monoklonaler Anti-PLOD3/LH3-Antikörper für WB, ELISA – O60568

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PLOD3/LH3

• PLOD3 (auch bekannt als LH3) ist ein multifunktionelles Enzym, das posttranslationale Modifikationen von Lysinresten in Prokollagen katalysiert – einschließlich Hydroxylierung, Galactosylierung und Glukosylierung. Diese Schritte sind entscheidend für die Kollagenstabilität und die Integrität der Basalmembran. Verwandte Referenzen: PMID:11956192 PMID:12475640 PMID:18298658
• Es katalysiert redundant die Bildung von Hydroxylysin in -Xaa-Lys-Gly- Motiven von Kollagenen. Verwandte Referenzen: PMID:11956192 PMID:12475640 PMID:18298658
• PLOD3 überträgt zudem Galactose auf Hydroxylysinreste und bildet so Galactosylhydroxylysin. Verwandte Referenzen: PMID:12475640 PMID:18298658 PMID:18834968
• Seine wesentliche Rolle liegt in der anschließenden Glukosyltransferase-Aktivität, bei der 1,2-Glukosylgalactosyl-5-hydroxylysin-Reste gebildet werden. Verwandte Referenzen: PMID:10934207 PMID:11896059 PMID:11956192
• PLOD3 wird für die normale Biosynthese und Sekretion von Typ-IV-Kollagenen sowie die Bildung der Basalmembran benötigt. Verwandte Referenzen: PMID:18834968
• Es lokalisiert hauptsächlich zum rauen Endoplasmatischen Retikulum, zum ER-Lumen und zur ER-Membran und kann in den extrazellulären Raum sezerniert werden.
• Das Protein ist ubiquitär exprimiert, mit relativ höheren Gehalten in Herz, Plazenta und Bauchspeicheldrüse und niedrigeren Gehalten in Lunge, Leber und Skelettmuskel. Verwandte Referenzen: PMID:9724729 PMID:9582318
• PLOD3 ist ein glykosyliertes, metallbindendes (Eisen und Mangan) Mitglied der Familien der Dioxygenasen und Glykosyltransferasen, Mutationen sind mit Krankheiten assoziiert.
• Es hydroxyliert und glykosyliert zudem die kollagenähnliche Domäne von MBL1, was seine Substratspezifität erweitert. Verwandte Referenzen: PMID:25419660

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 25-306 von humanem PLOD3 und deckt eine Region ab, die wahrscheinlich für die Antikörperbindung zugänglich ist. Für den Western Blot sollten reduzierende Bedingungen zur Detektion der 85-kDa-Bande verwendet werden, und die Validierung sollte mit Lysaten von humanen und murinen Zelllinien erfolgen, die bekanntermaßen PLOD3 exprimieren (z. B. Herz, Plazenta).
• Der Antikörper ist für ELISA validiert; für Sandwich-ELISA-Anwendungen kann die Paarung mit einem anderen Klon, der ein anderes Epitop erkennt, die Empfindlichkeit verbessern. Die Kreuzreaktivität mit Maus deutet auf eine Eignung für Untersuchungen an Nagetiermodellen hin, die Kreuzreaktivität mit anderen Arten sollte jedoch experimentell überprüft werden.
• Da PLOD3 ein ER-ständiges und sezerniertes Protein ist, kann die Probenvorbereitung für WB von subzellulären Fraktionierungs- oder Anreicherungsstrategien profitieren, insbesondere bei Proben mit geringer endogener Expression.

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