Anti-PLK3-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q9H4B4

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PLK3-Funktion und -Lokalisierung

• Proteinidentität und Familie: Die Serin/Threonin-Proteinkinase PLK3 (auch bekannt als zytokininduzierbare Serin/Threonin-Proteinkinase, FGF-induzierbare Kinase, proliferationsbezogene Kinase) ist ein Mitglied der Polo-like-Kinase-Familie. Sie enthält eine katalytische Domäne und POLO-Box-Domänen, die die Substraterkennung durch phosphorylierungsabhängige Bindung vermitteln.
• Regulation des Zellzyklus: PLK3 ist für den Eintritt in die S-Phase und die Zytokinese erforderlich. Es reguliert den G2-Kontrollpunkt und den mitotischen Fortschritt durch Phosphorylierung von CDC25C und BCL2L1, was den Übergang des Zellzyklus beeinflusst.
• Stressantwort und DNA-Schädigung: PLK3 wird schnell durch Stressreize wie ionisierende Strahlung, reaktive Sauerstoffspezies (ROS), hyperosmotischen Stress, UV-Bestrahlung und Hypoxie aktiviert. Es phosphoryliert p53/TP53, um Apoptose zu fördern, CHEK2, um den G2/M-Kontrollpunkt durchzusetzen, und p73/TP73, um dessen pro-apoptotische Funktionen zu hemmen.
• Wichtige Phosphorylierungsziele: Zu den PLK3-Substraten gehören ATF2, BCL2L1, CDC25A, CDC25C, CHEK2, HIF1A, JUN, p53/TP53, p73/TP73, PTEN, TOP2A und VRK1. Diese Interaktionen vermitteln seine Rollen in der Kontrollpunkt-Kontrolle, Apoptose und Golgi-Dynamik.
• Golgi-Disassembly: PLK3 nimmt an der Golgi-Fragmentierung während der Mitose über einen MEK1/MAP2K1-abhängigen Weg teil, indem es VRK1 am Golgi-Apparat phosphoryliert und so eine ordnungsgemäße Verteilung der Organellen sicherstellt.
• Subzelluläre Lokalisierung: PLK3 zeigt eine dynamische Lokalisierung im Zytoplasma, Kern, Nukleolus, Golgi-Apparat und Zentrosom, was seinen vielfältigen Funktionen im Zellzyklus und in der Stresssignalisierung entspricht.
• Gewebe- und Differenzierungsexpression: Transkripte werden stark in Plazenta, Lunge, Skelettmuskel, Herz, Bauchspeicheldrüse, Eierstöcken und Nieren nachgewiesen; schwach in Leber und Gehirn. In hämatopoetischen Zellen wird PLK3 stark und spezifisch in terminal differenzierten Makrophagen exprimiert. Die Expression ist in primären Lungentumoren herunterreguliert.
• Posttranslationale Modifikationen und Schlüsselwörter: PLK3 wird als Phosphoprotein (Proteomics-Identifikation) mit ATP-Bindung und Serin/Threonin-Proteinkinase-Aktivität klassifiziert. UniProt-Schlüsselwörter umfassen Apoptose, Zellzyklus, DNA-Schädigung, Golgi-Apparat und Referenzproteom.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 487–646 (C-terminale Region) und deckt einen Teil der zweiten POLO-Box-Domäne ab. Diese Region kann Spezifität innerhalb der PLK-Familie bieten; eine Kreuzreaktivität mit PLK1 oder PLK2 sollte experimentell bestätigt werden, falls erforderlich.
• Für Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht ca. 72 kDa. Validieren Sie die Detektion in der vorgesehenen Spezies (Human, Maus, Ratte) und dem Probentyp. Verwenden Sie geeignete Ladekontrollen und erwägen Sie siRNA-vermittelte Knockdown- oder Knockdown-Lysate, um die Bandenidentität zu verifizieren.
• ELISA-Anwendungen können durch Testen der Beschichtungsbedingungen und Antikörperverdünnungen optimiert werden; der Antikörper wird als polyklonaler Kaninchenantikörper geliefert, geeignet für Standard-Indirekt-ELISA-Protokolle.
• Um stressinduzierte Wege zu untersuchen, behandeln Sie Zellen mit DNA-schädigenden Mitteln (z. B. Etoposid, UV), ROS-Induktoren (z. B. H₂O₂) oder Hypoxie-Mimetika (z. B. CoCl₂) und bestätigen Sie die PLK3-Aktivierung oder Expressionsänderungen per WB.
• Für Immunfluoreszenz oder Immunhistochemie sollten Benutzer Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen etablieren, die mit den nachgewiesenen subzellulären Kompartimenten (zytoplasmatisch, nukleär, Golgi) kompatibel sind. Beachten Sie, dass die endogenen PLK3-Spiegel in einigen Zelltypen niedrig sein können; eine Anreicherung oder Signalverstärkung kann erforderlich sein.

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