Monoklonaler Anti-PKM2-Antikörper für WB, IF/ICC, IP, ELISA - P14618

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PKM2

• PKM2 katalysiert den letzten geschwindigkeitsbestimmenden Schritt der Glykolyse, indem es eine Phosphorylgruppe von Phosphoenolpyruvat (PEP) auf ADP überträgt und ATP erzeugt. Die Enzymaktivität wird durch ein dynamisches Gleichgewicht zwischen einem hochaktiven Tetramer und einem nahezu inaktiven Dimer reguliert, das das Schicksal von Glukose-Kohlenstoffen für Energieproduktion oder Biosynthese bestimmt. Verwandte Referenzen: PMID:15996096 PMID:1854723 PMID:20847263
• Das PKM-Gen erzeugt zwei wichtige Isoformen durch alternatives Spleißen: die adulte M1-Isoform (PKM1) und die embryonale M2-Isoform (PKM2). PKM2 besitzt eine geringe intrinsische Pyruvatkinase-Aktivität und erfordert eine allosterische Aktivierung durch D-Fruktose-1,6-bisphosphat (FBP), wohingegen PKM1 konstitutiv aktiv ist. Verwandte Referenzen: PMID:18337823 PMID:20847263
• Zusätzlich zu seiner zytoplasmatischen Stoffwechselfunktion fungiert PKM2 als nukleare Proteinkinase. Nach Stimuli wie der EGF-Rezeptoraktivierung translokiert PKM2 in den Zellkern und phosphoryliert Ziele wie STAT3 an Tyr-705 und Histon H3 an Thr-11, wodurch die Transkription von Genen gefördert wird, die an Zellproliferation, Angiogenese (z. B. VEGFA) und Tumorentstehung beteiligt sind. Verwandte Referenzen: PMID:18191611 PMID:21620138 PMID:22056988 PMID:22306293 PMID:22901803 PMID:24120661 PMID:33314660 PMID:26787900 PMID:17308100
• PKM2 wird überwiegend in stark proliferativen Zellen exprimiert, darunter embryonale Stammzellen, embryonale Karzinomzellen und Krebszellen, wodurch es zu einem etablierten Tumorbiomarker wird. Die adulte Isoform PKM1 wird in normalen adulten Geweben exprimiert und fehlt im Allgemeinen in Tumoren. Verwandte Referenzen: PMID:18337823
• PKM2 lokalisiert sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern. Seine nukleare Translokation wird durch verschiedene Signalwege induziert und ist entscheidend für seine nicht-stoffwechselbedingten, onkogenen Funktionen.
• Posttranslationale Modifikationen wie Acetylierung, Phosphorylierung, Hydroxylierung und Methylierung regulieren streng die metabolische Aktivität, Proteinstabilität und den nuklearen Import von PKM2 und verbinden den zellulären Stoffwechselstatus mit Signalnetzwerken.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Aminosäuren 380–480 von humanem PKM2 (NP_002645.3) umfasst, das innerhalb der einzigartigen C-terminalen Region liegt, die PKM2 von der M1-Isoform unterscheidet. Dieses Design deutet auf eine hohe Spezifität für PKM2 gegenüber PKM1 hin.
• Für die Western Blot liegt das vorausgesagte Molekulargewicht von PKM2 bei etwa 58 kDa. Validieren Sie die Leistung des Antikörpers mit geeigneten Positivkontrollen (z. B. humane Krebszelllinien) und erwägen Sie die Optimierung der Verdünnung des Primärantikörpers und der Belichtungszeiten.
• Bei Immunfluoreszenz/Immunozytochemie (IF/ICC) testen Sie verschiedene Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle, um die Lokalisation von PKM2 zu erhalten, da es sowohl zytoplasmatisch als auch nuklear vorliegen kann.
• Für die Immunpräzipitation (IP) verwenden Sie native Lysebedingungen, um Proteinkomplexe zu erhalten und die Effizienz der Zielerfassung zu bestätigen.
• Bei der Durchführung von ELISA erstellen Sie Standardkurven mit rekombinantem PKM2-Protein und validieren Sie Empfindlichkeit und Spezifität in der entsprechenden Probenmatrix.
• Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-PKM2 ist angegeben; überprüfen Sie die Erkennung des Ziels in Ihrem spezifischen experimentellen System mit artspezifischen Kontrollen.

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