Anti-PKM1/2 Kaninchen PolymAb® Monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA - P14618

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PKM1/2-Funktion und -Lokalisierung

• PKM1/2, codiert durch das PKM-Gen, ist eine Pyruvatkinase, die den geschwindigkeitsbestimmenden letzten Schritt der Glykolyse katalysiert, indem sie eine Phosphorylgruppe von Phosphoenolpyruvat (PEP) auf ADP überträgt, um ATP zu erzeugen. Verwandte Referenzen: PMID:15996096, PMID:1854723, PMID:20847263
• Das PKM-Gen produziert durch alternatives Spleißen zwei Hauptisoformen: das embryonale und tumorassoziierte PKM2 sowie das gewebsspezifische PKM2 für erwachsene Gewebe, die sich in ihrer Regulation und Aktivität unterscheiden. Verwandte Referenzen: PMID:18337823, PMID:20847263
• Die Aktivität von PKM2 wird durch einen allosterischen Schalter zwischen einem hochaktiven Tetramer und einem fast inaktiven Dimer gesteuert; dieser Wechsel bestimmt, ob Glukose für die ATP-Produktion verwendet oder in biosynthetische Wege umgeleitet wird, ein kritischer Prozess für die Proliferation und das Überleben von Tumorzellen. Verwandte Referenzen: PMID:15996096, PMID:1854723, PMID:20847263
• Neben seiner zytoplasmatischen metabolischen Rolle transloziert PKM2 in den Zellkern, wo es als Proteinkinase wirkt und Ziele wie STAT3 (Tyr-705) und Histon H3 (Thr-11) phosphoryliert, um die Transkription zu modulieren, einschließlich der Förderung der VEGFA-Expression bei der Angiogenese. Verwandte Referenzen: PMID:18191611, PMID:21620138, PMID:22056988, PMID:22306293, PMID:22901803, PMID:24120661
• PKM2 wird spezifisch in proliferierenden Zellen wie embryonalen Stammzellen und Krebszellen exprimiert, während PKM1 vorwiegend in normalen adulten Geweben gefunden wird. Verwandte Referenzen: PMID:18337823
• Das Protein lokalisiert sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern, was seiner Doppelrolle im Stoffwechsel und der transkriptionellen Regulation entspricht.
• Das PKM2-Protein unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen – einschließlich Acetylierung, Methylierung, Phosphorylierung und Hydroxylierung –, die seine enzymatische Aktivität, Lokalisierung und nicht-metabolischen Funktionen regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western-Blot- und immunhistochemische Anwendungen verwenden Sie Zell- oder Gewebelysate menschlichen, murinen oder rattischen Ursprungs, da der Antikörper eine breite Kreuzreaktivität zeigt.
• Angesichts der dualen zytoplasmatischen und nukleären Lokalisierung von PKM1/2 sollten Sie entsprechende Fraktionierungs- oder Co-Färbungsprotokolle in IF/ICC-Experimenten in Betracht ziehen, um die subzelluläre Verteilung zu bestätigen.
• Bei der Bewertung von PKM2-spezifischen Funktionen validieren Sie die Nachweisspezifität durch die Verwendung von PKM2-defizienten Zelllinien oder siRNA-vermitteltem Knockdown, da das Immunogen einen Bereich abdeckt, der zwischen den Isoformen konserviert ist.
• Optimieren Sie die Antikörperverdünnungen für jede Anwendung durch eine Verdünnungsreihe, da die optimalen Arbeitskonzentrationen je nach Probentyp und Nachweissystem variieren können.

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