Anti-PKM1/2-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA – P14618

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PKM1/2

• Katalysiert den letzten geschwindigkeitsbestimmenden Schritt der Glykolyse, indem eine Phosphorylgruppe von Phosphoenolpyruvat (PEP) auf ADP übertragen wird und ATP entsteht.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:15996096 | PMID:1854723 | PMID:20847263
• Das Verhältnis zwischen der hochaktiven tetrameren Form und der nahezu inaktiven dimeren Form bestimmt, ob Glukosekohlenstoff in biosynthetische Prozesse eingeschleust oder zur glykolytischen ATP-Produktion verwendet wird – ein für die Proliferation und das Überleben von Tumorzellen entscheidender Schalter.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:15996096 | PMID:1854723 | PMID:20847263
• Die M2-Isoform (PKM2), die während der Embryogenese und in Tumoren vorherrscht, weist eine geringe basale Pyruvatkinase-Aktivität auf und benötigt eine allosterische Aktivierung durch D-Fructose-1,6-bisphosphat. Über ihre metabolische Funktion hinaus transloziert PKM2 nach einer Signalübertragung in den Zellkern, wo es als Proteinkinase wirkt und STAT3 an Tyr-705 sowie Histon H3 an Thr-11 phosphoryliert, um die Transkription von Genen wie VEGFA und CD274 anzutreiben und dadurch Angiogenese sowie Immunevasion zu fördern.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:18337823 | PMID:20847263 | PMID:18191611 | PMID:21620138 | PMID:22056988 | PMID:22306293 | PMID:22901803 | PMID:24120661 | PMID:33314660 | PMID:26787900
• Die M1-Isoform (PKM1), die in adulten Geweben exprimiert wird, zeigt eine konstitutiv hohe Pyruvatkinase-Aktivität unabhängig von allosterischen Aktivatoren und ersetzt funktionell PKM2 nach der Geburt.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:18337823 | PMID:20847263
• Die subzelluläre Lokalisation ist dynamisch: PKM1/2 befindet sich überwiegend im Zytoplasma, aber im Fall von PKM2 lösen verschiedene Stimuli wie EGF eine Translokation in den Zellkern aus, wo die Homodimerisierung seine Proteinkinasefunktionen ermöglicht.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:22056988 | PMID:22306293 | PMID:22901803
• Gewebespezifität: PKM2 ist in proliferierenden Zellen, einschließlich embryonaler Stammzellen und Krebszellen, spezifisch angereichert, während PKM1 in vielen adulten Geweben vorkommt, jedoch in Tumorzellen auffällig fehlt.
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:18337823
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Phosphorylierung, Hydroxylierung und Ubiquitinierung, stimmen die Aktivität, Stabilität und den subzellulären Transport von PKM1/2 fein ab und unterstreichen seine Rolle als regulatorisches Zentrum in Stoffwechsel und Signalübertragung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäurereste 11–221 von PKM1/2 (NP_001193728.1), eine zwischen PKM1 und PKM2 konservierte Region; Forschende sollten die Isoformspezifität in ihrem experimentellen System validieren.
• Beim Western Blot (WB) wird eine Bande bei etwa 58 kDa erwartet. Geeignete positive und negative Kontrolllysate (z. B. aus Krebs- und Normalgewebe) sollten verwendet werden, um die Reaktivität zu bestätigen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) wird eine Optimierung der Antigen-Retrieval-Methode und der Antikörperverdünnung für formalinfixierte, paraffineingebettete Schnitte empfohlen.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollten Fixierung und Permeabilisierung optimiert werden, um die duale zytoplasmatische/nukleäre Lokalisation von PKM2 unter spezifischen Stimuli zu erhalten.
• Bei ELISA-Anwendungen sollten die optimale Antikörperkonzentration und die Beschichtungsbedingungen empirisch anhand standardmäßiger indirekter oder Sandwich-Protokolle bestimmt werden.

CamelBio: Ihre zentrale Beschaffungsplattform

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