Anti-PKACα-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB und ELISA – P17612

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PKACα

• PKACα (PRKACA) ist die katalytische Alpha-Untereinheit der cAMP-abhängigen Proteinkinase. Es gibt zwei Isoformen: die ubiquitär vorkommende Isoform 1 und die spermien-spezifische Isoform 2, die in Pachytän-Spermatocyten angereichert ist.
• Es phosphoryliert zahlreiche zytoplasmatische und nukleäre Substrate, darunter CDC25B, ABL1, NFKB1, Histon H1.4 und VASP, und reguliert dadurch den Zellzyklus, die Transkription und die Motilität. Verwandte Referenzen: PMID:15642694, PMID:15905176, PMID:16387847
• In Thrombozyten bildet PKACα Komplexe mit NF-κB und IκBα, um den Ruhezustand aufrechtzuerhalten. Die Stimulation durch Agonisten führt zur Dissoziation des Komplexes, wodurch PKACα für die Phosphorylierung von VASP freigesetzt wird und die Aggregation fördert. Verwandte Referenzen: PMID:15642694, PMID:20356841
• PKACα hemmt die Smoothened-Signalübertragung, indem es GLI-Transkriptionsfaktoren (GLI1/2/3) phosphoryliert, deren Prozessierung auslöst und die Expression von Zielgenen in Abwesenheit von Hedgehog-Liganden blockiert. Verwandte Referenzen: PMID:16705181
• Die Sequestrierung von PKACα durch den Smoothened-Rezeptor an der Zellmembran verhindert die GLI-Phosphorylierung und ermöglicht dadurch die Aktivierung des Signalwegs. Verwandte Referenzen: PMID:36202993, PMID:39138140
• PKACα verstärkt die Aktivität des RYR2-Kalziumkanals, verändert die Dynamik der Kalziumfreisetzung und trägt zur durch Speicherüberladung induzierten Ca²⁺-Freisetzung bei. Verwandte Referenzen: PMID:17693412
• Es reguliert mTORC1 negativ, indem es RPTOR phosphoryliert, und verbindet dadurch die cAMP-Signalübertragung mit der Nährstofferkennung. Verwandte Referenzen: PMID:31112131
• Auf subzellulärer Ebene kommt PKACα im Zytoplasma, im Zellkern, an der Zellmembran, in den Mitochondrien und in Zellfortsätzen (Zilien/Geißeln) vor, was seine vielfältigen Funktionen widerspiegelt.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht einer konservierten Region (Aminosäuren 251–351) innerhalb der katalytischen Domäne. Eine Kreuzreaktivität mit anderen katalytischen PKA-Untereinheiten (PRKACB, PRKACG) ist möglich. Daher sollte die Spezifität in Ihrem System überprüft werden.
• Im Western Blot wird eine Hauptbande bei etwa 39–40 kDa erwartet. Zusätzliche Banden können Isoformen oder Abbauprodukte darstellen. Verwenden Sie geeignete Positiv- und Negativkontrollen.
• Für den ELISA sollten sowohl das Beschichtungsantigen als auch der Antikörper titriert werden, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu optimieren. Erwägen Sie die Verwendung eines rekombinanten PKACα-Fragments als Standard.
• Aufgrund seiner Rolle in mehreren Signalwegen sollten Proben mit Phosphatase-Inhibitoren behandelt werden, um phosphoabhängige Wechselwirkungen zu erhalten, sofern solche Zusammenhänge untersucht werden.

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