Anti-PKA C-alpha (PRKACA) Monoklonaler Antikörper (KD-validiert) für WB, IF/ICC, ELISA - P17612

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: PKA C-alpha (PRKACA) Funktion und Lokalisierung

• PRKACA kodiert die katalytische Untereinheit Alpha der cAMP-abhängigen Proteinkinase (PKA), eine Serin/Threonin-Kinase, die zahlreiche zytoplasmische und nukleäre Substrate phosphoryliert und eine zentrale Rolle in cAMP-Signaltransduktionskaskaden spielt (PubMed:15642694, PubMed:15905176, PubMed:16387847). Verwandte Referenzen: PMID:15642694 PMID:15905176 PMID:16387847

• Das Enzym moduliert die Chromatinstruktur und die Transkription durch Phosphorylierung von Histon H1.4 und der NF-kappa-B-p50-Untereinheit (NFKB1) und beeinflusst dadurch die Genexpression und die DNA-Bindungsaktivität (PubMed:15178447, PubMed:15642694, PubMed:15905176). Verwandte Referenzen: PMID:15178447 PMID:15642694 PMID:15905176

• In Blutplättchen phosphoryliert PRKACA VASP, um zirkulierende Blutplättchen in einem Ruhezustand zu halten; bei Störung durch Thrombin oder Kollagen fördert freies aktives PRKACA die Blutplättchenaggregation (PubMed:15642694, PubMed:20356841). Verwandte Referenzen: PMID:15642694 PMID:20356841

• PRKACA wirkt als Schlüsselinhibitor des Smoothened-Signalwegs durch Phosphorylierung der GLI-Transkriptionsfaktoren (GLI1, GLI2, GLI3), wodurch deren Verarbeitung gefördert und die Aktivierung von Zielgenen in Abwesenheit von Hedgehog-Liganden verhindert wird (PubMed:16705181, PubMed:36202993, PubMed:39138140). Verwandte Referenzen: PMID:16705181 PMID:36202993 PMID:39138140

• Subzellulär lokalisiert sich PRKACA im Zytoplasma, Kern, Zellmembran, Mitochondrien und spezifischen Fortsätzen wie Zilien und Geißeln, was seine vielfältigen regulatorischen Rollen widerspiegelt. Die Gewebeexpression ist isoformspezifisch: Isoform 1 ist ubiquitär, während Isoform 2 spermien-spezifisch und in Pachytän-Spermatozyten angereichert ist.

• Posttranslationale Modifikationen einschließlich N-terminaler Myristoylierung und Phosphorylierung regulieren ihre katalytische Aktivität, subzelluläre Zielrichtung und Stabilität. Alternatives Spleißen führt zu den unterschiedlichen Isoformen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde unter Verwendung von rekombinantem humanen PRKACA-Protein hergestellt; er kreuzreagiert mit Mensch, Maus und Ratte, was ihn für Studien über diese Spezies hinweg geeignet macht. Validieren Sie die endogenen Expressionsniveaus in Ihrem Modellsystem vor quantitativen Analysen.
• Für WB beträgt das erwartete Molekulargewicht ca. 41 kDa; fügen Sie geeignete positive und negative Kontrollen (z. B. PRKACA-überexprimierende und siRNA-behandnete Lysate) hinzu, um die Bandspezifität zu bestätigen.
• Für IF/ICC sollten Fixierungs/Permeabilisierungsprotokolle in Betracht gezogen werden, die die Antigenität erhalten; rechnen Sie mit zytoplasmischen und nukleären Färbemustern, die mit der berichteten Lokalisierung übereinstimmen.
• Für ELISA titrieren Sie den Antikörper für ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis und kombinieren ihn mit einem geeigneten Sekundärantikörper; validieren Sie die Leistung mit rekombinantem Protein oder Zelllysaten.
• Der Status „KD-validiert“ gibt an, dass die Antikörperspezifität mittels siRNA- oder shRNA-vermittelter Knockdown-Ansätze bestätigt wurde; erwägen Sie die Einbeziehung von Knockdown-Kontrollen in Ihre Assays, um die Signalabhängigkeit von der Zielexpression weiter zu verifizieren.

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