Anti-PI4KA-Kaninchen-polykolonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – P42356

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von PI4KA

• PI4KA (Phosphatidylinositol-4-Kinase Alpha), auch bekannt als PIK4CA oder PI4K-ALPHA, ist eine Lipidkinase, die die Phosphorylierung von Phosphatidylinositol zu Phosphatidylinositol-4-phosphat katalysiert, dem ersten festgelegten Schritt bei der Bildung des sekundären Botenstoffs Inositol-1,4,5-trisphosphat.
• Dieses Enzym spielt eine zentrale Rolle in den Phosphoinositid-Signalwegen und reguliert den Membrantransport, die Zellproliferation und die intrazelluläre Calcium-Homöostase.
• Aufgrund alternativen Spleißens existieren mehrere Isoformen; die kanonische Isoform ist ein großes Protein mit einem Molekulargewicht von ungefähr 237 kDa.
• PI4KA ist hauptsächlich im Zytoplasma und in der Zellmembran lokalisiert, wo es mit der Plasmamembran assoziiert ist, um seine Kinaseaktivität auszuüben.
• Die Gewebeexpression ist ubiquitär, mit den höchsten Konzentrationen in Plazenta und Gehirn; in Lunge, Leber, Pankreas, Hoden und Leukozyten ist die Expression gering oder nicht nachweisbar.
• Das Protein enthält eine ATP-Bindungsdomäne und eine Lipidkinasedomäne; seine Aktivität wird durch Phosphorylierung reguliert.
• Mutationen in PI4KA stehen mit hereditärer spastischer Paraplegie (SPG84) und anderen neurologischen Erkrankungen in Zusammenhang, was seine Bedeutung für die neuronale Funktion unterstreicht.
• Zu den UniProt-Schlüsselwörtern gehören alternatives Spleißen, ATP-Bindung, Krankheitsvariante, hereditäre spastische Paraplegie, Kinase, Lipidstoffwechsel, Membran, Neurodegeneration und Phosphoprotein.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der C-terminalen Region (AS 1780–1860); der Antikörper kann Epitope in diesem Abschnitt erkennen und dadurch den Nachweis von vollständigem PI4KA ermöglichen.
• Aufgrund der großen Proteingröße (237 kDa) sollte für den Western Blot ein SDS-PAGE-Gel mit niedrigem Acrylamidanteil (z. B. 6–8 %) und verlängerten Transferzeiten verwendet werden.
• Für Immunfluoreszenz/ICC sollten die Bedingungen für Fixierung und Permeabilisierung optimiert werden; zur Detektion des membranassoziierten PI4KA können Triton X-100 oder Digitonin verwendet werden.
• Die Antikörperspezifität sollte in relevanten Zelllinien (z. B. HeLa, SH-SY5Y) oder Geweben validiert werden, von denen bekannt ist, dass sie PI4KA exprimieren. Außerdem sollte eine Negativkontrolle wie Lungen- oder Leberlysat eingeschlossen werden, in denen die Expression gering ist.
• Für ELISA sollte die Verwendung eines rekombinanten PI4KA-Fragments als Standard in Betracht gezogen werden, um die Assayempfindlichkeit und den linearen Messbereich zu bestimmen.

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