Anti-PI3-Kinase-p85-Alpha/Beta-Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, ELISA – P27986 / O00459

Wesentliche Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung der PI3-Kinase p85 alpha/beta

• Diese regulatorischen Untereinheiten der Phosphatidylinositol-3-Kinase werden von PIK3R1 (p85-alpha) und PIK3R2 (p85-beta) kodiert und fungieren als Adapterproteine, die über SH2-Domänen die katalytische p110-Untereinheit mit aktivierten Rezeptor-Tyrosinkinasen verbinden.
• Bindet über seine SH2-Domäne an aktivierte Protein-Tyrosinkinasen und vermittelt die Translokation der katalytischen p110-Untereinheit an die Membran. Es ist essenziell für die insulin-stimulierte Glukoseaufnahme und Glykogensynthese in insulinempfindlichen Geweben und beteiligt sich an Signalwegen, die stromabwärts von FGFR, KIT und PDGFR liegen. Imitiert ER-Stressreaktionen, indem es die Translokation von XBP1 in den Zellkern der Leber fördert und dadurch zu einer verbesserten Glukosetoleranz beiträgt. Zugehörige Referenzen: PMID:17626883 PMID:19805105 PMID:7518429 PMID:20348923
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere Isoformen; Isoform 2 wird überwiegend in der Skelettmuskulatur und im Gehirn exprimiert, mit geringeren Konzentrationen in Niere und Herzmuskel.
• Die subzelluläre Lokalisierung ist hauptsächlich zytoplasmatisch, wo das Protein die Signalübertragung von Membranrezeptoren zu intrazellulären Effektoren erleichtert.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Acetylierung, Phosphorylierung und Ubiquitinierung, die seine Stabilität und Aktivität beeinflussen. Schlüsselwörter wie SH2-Domäne, SH3-Domäne, Wirt-Virus-Interaktion und Krankheitsvariante (Kleinwuchs) verdeutlichen seine vielfältigen Funktionen.
• Fungiert als Wirtsfaktor bei viralen Interaktionen und steht mit Entwicklungsstörungen wie dem SHORT-Syndrom (Kleinwuchs) in Verbindung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht einem Peptid innerhalb der Aminosäuren 400–500 des humanen p85 alpha/beta, einer Region, die in beiden Isoformen konserviert ist und dadurch die Erkennung der Alpha- und Beta-Varianten unterstützt.
• Für den Western Blot (WB) sollte der Antikörper in Lysaten humaner oder muriner Zelllinien validiert werden, von denen bekannt ist, dass sie PI3K p85 exprimieren (z. B. HeLa, 3T3-L1-Adipozyten). Erwartete Banden: ca. 42–54 kDa (überwiegend p85-alpha) und ca. 81–84 kDa (p85-beta). Zusätzliche Banden durch Spleißisoformen oder Abbauprodukte können auftreten; die Lysatpräparation und Probenbeladung sollten entsprechend optimiert werden.
• Für ELISA sollte nach einer hauseigenen Prüfung die Kombination mit einem validierten Fang-/Detektionsantikörper in Betracht gezogen werden. Überprüfen Sie die Kreuzreaktivität mit verwandten Isoformen und verwenden Sie geeignete Blockierungs- und Waschbedingungen, um den Hintergrund zu minimieren.
• Da die Kreuzreaktivität für Mensch und Maus angegeben ist, sollte die Konservierung der Zielsequenz überprüft werden, wenn der Antikörper auf andere Spezies ausgeweitet werden soll; führen Sie vor der Anwendung ein Sequenz-Alignment durch.

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