Anti-Phospho-ZAP70 (Y493) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P43403

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ZAP70-Funktion und -Lokalisation

• ZAP70 (70 kDa Zeta-Ketten-assoziiertes Protein) ist eine cytoplasmatische Tyrosinkinase, die für die Regulation der adaptiven Immunität essentiell ist und die T-Zell-Rezeptor (TCR)-Signalgebung nach Antigenpräsentation vermittelt (PubMed:7509083). Verwandte Referenzen: PMID:7509083
• Das Protein enthält tandemartige SH2-Domänen, die phosphorylierte ITAM-Motive an CD3-Ketten binden, die Autoinhibition aufheben und die LCK-vermittelte Phosphorylierung an Tyr493 für die vollständige Aktivierung ermöglichen.
• Nach der Aktivierung phosphoryliert ZAP70 Schlüsseladapterproteine wie LAT und LCP2, was nachgeschaltete Kaskaden auslöst, die die T-Zell-Proliferation, die Zytokinproduktion und die Reorganisation des Zytoskeletts regulieren.
• ZAP70 ist an der Thymozytenentwicklung beteiligt, fördert das Überleben und den Zellzyklusfortschritt von CD4/CD8-doppelt-negativen Zellen vor der positiven Selektion.
• Es trägt auch zur B-Zell-Entwicklung und -Aktivierung über die B-Zell-Rezeptor-Signalgebung bei, was seine breiteren lymphatischen Rollen unterstreicht.
• Die subzelluläre Lokalisation ist primär cytoplasmatisch, mit Rekrutierung an die Plasmamembran nach TCR-Engagement; es ist auch an der TCR-Internalisierung über CBL-vermittelte Ubiquitinierung beteiligt.
• Wird hauptsächlich in T-Zellen, natürlichen Killerzellen, frühen Thymozyten und Pro-/Prä-B-Zellen exprimiert; genetische Defekte verursachen schwere kombinierte Immundefizienz (SCID) und Autoimmunerkrankungen.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Tyrosinphosphorylierung, Acetylierung und Ubiquitinierung, die für seine dynamische Regulation entscheidend sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da es sich um einen phospho-spezifischen Antikörper gegen Tyr493 handelt, stellen Sie sicher, dass Proben während der Lyse mit Phosphatase-Inhibitoren behandelt werden, und ziehen Sie eine Phosphatase-Behandlung als Negativkontrolle in Betracht.
• Für Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 70 kDa; verwenden Sie einen geeigneten Gel-Prozentsatz (z.B. 8-10%) für eine optimale Auflösung.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität in Ihrem Modellsystem mithilfe von Peptid-Kompetition oder genetischen Knockdown/Knockout-Ansätzen.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) kann eine Antigen-Demaskierung erforderlich sein; testen Sie pH 6 oder pH 9 Demaskierungspuffer.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) sollte die Membranlokalisation nach Stimulation überwacht werden; Permeabilisierungs- und Fixierungsbedingungen sollten optimiert werden.
• ELISA und andere Anwendungen erfordern möglicherweise eine Titration, um die optimale Arbeitskonzentration zu bestimmen.

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