Anti-Phospho-Zap70-Y319+Syk-Y352 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P43403/P43405

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ZAP70-Funktion und Lokalisierung

• ZAP70 (70 kDa Zeta-Ketten-assoziiertes Protein) ist eine cytoplasmatische Tyrosinkinase aus der Syk-Familie, auch bekannt als Syk-verwandte Tyrosinkinase (SRK).
• Essentiell für die T-Zell-Rezeptor (TCR)-Signalübertragung: Nach TCR-Aktivierung wird ZAP70 zu phosphorylierten ITAM-Motiven auf CD3-Ketten rekrutiert, wo es durch LCK phosphoryliert und aktiviert wird und nachgeschaltete Signalkaskaden initiiert. Verwandte Referenzen: PMID:7509083
• Aktiviertes ZAP70 phosphoryliert Adapterproteine LAT und LCP2, wodurch ein Signalnetzwerk ausgelöst wird, das die T-Zell-Aktivierung, Proliferation, Zytokinproduktion und Differenzierung reguliert.
• Zusätzlich zur TCR-Signalgebung steuert ZAP70 die T-Zell-Adhäsion, Motilität und zytoskelettale Umorganisation; es vermittelt auch die TCR-Internalisierung und den Abbau über Interaktion mit CBL, SLA und SLA2 und moduliert so die Oberflächen-TCR-Spiegel.
• ZAP70 trägt auch zur B-Zell-Entwicklung und -Aktivierung durch B-Zell-Rezeptor (BCR)-Signalgebung bei.
• Während der Thymozytenentwicklung fördert ZAP70 das Überleben und den Zellzyklusfortschritt von CD4/CD8 doppelnegativen Thymozyten vor der positiven Selektion.
• Subzelluläre Lokalisierung: Überwiegend cytoplasmatisch, translokiert aber nach TCR-Stimulation zur Plasmamembran.
• Gewebeexpression: Hauptsächlich in T-Zellen und natürlichen Killerzellen, mit niedrigeren Spiegeln in frühen Thymozyten und Pro-/Prä-B-Zellen.
• Zu den Schlüsselmerkmalen gehören N-terminale tandem SH2-Domänen, die phosphorylierte ITAMs binden, eine Kinasedomäne mit einer ATP-Bindungsstelle und multiple Phosphorylierungsstellen (z.B. Y319), die die Aktivität regulieren; annotiert mit Schlüsselwörtern wie Phosphoprotein, alternatives Spleißen und Krankheitsvariante.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid um Y319 von humanem ZAP70; der Antikörper erkennt aufgrund der Sequenzähnlichkeit um die Phosphorylierungsstelle auch das entsprechende Phospho-Y352 von Syk.
• Für Western Blotting sollten Lysate von T-Zelllinien in Betracht gezogen werden, die mit Anti-CD3 oder Pervanadat stimuliert wurden, um eine robuste Phosphorylierung zu induzieren; ein Dephosphorylierungskontroll (z.B. λ-Phosphatase-Behandlung) sollte zur Bestätigung der Phospho-Spezifität eingeschlossen werden.
• Bei der Immunfluoreszenz/ICC sollten Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen optimiert werden, um sowohl das Phospho-Epitop als auch die zelluläre Architektur zu erhalten; eine Gegenfärbung mit einem Gesamt-ZAP70-Antikörper hilft, den Aktivierungsstatus zu beurteilen.
• Für ELISA kann ein Phosphopeptid-Beschichtungsantigen verwendet werden; Blockierschritte sollten sicherstellen, dass unspezifische Bindung minimiert wird.
• Die Kreuzreaktivität mit Maus ermöglicht den Nachweis in murinen T-Zell-Modellen; jedoch sollte die Reaktivität im spezifischen experimentellen System validiert werden.
• Das vorhergesagte Molekulargewicht von ZAP70 beträgt ~70 kDa; für Syk wird die ~72 kDa-Isoform detektiert. Im WB kann dies je nach Auflösung als eng beieinander liegende Banden oder als einzelne Bande erscheinen.

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