Anti-Phospho-VASP-S239 polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P50552

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: VASP-Funktion und -Lokalisation

• VASP (Vasodilatator-stimuliertes Phosphoprotein) ist ein Aktin-assoziiertes Protein aus der Ena/VASP-Familie, das eine kritische Rolle bei der Dynamik des Aktinzytoskeletts und der Zellpolarität spielt.
• VASP fördert die Verlängerung von Aktinfilamenten, indem es die "barbed ends" vor Capping-Proteinen schützt und die Polymerisationsraten erhöht, wodurch es die Dynamik von Lamellipodien und Filopodien, die Thrombozytenaktivierung und die Zellmigration reguliert.
• In Thrombozyten, wo es stark exprimiert wird, reguliert VASP die Aktindynamik und spielt eine wichtige Rolle bei der Thrombozytenaggregation.
• VASP lokalisiert an Fokaladhäsionen, Tight Junctions und der Membran von Lamellipodien und Filopodien und wirkt an Orten dynamischer Aktinumgestaltung.
• VASP ist ein Phosphoprotein; die Phosphorylierung an regulatorischen Stellen moduliert seine Funktionen bei der Aktinassemblierung, wobei S239 ein Schlüsselziel für Kinase-Signalisierung ist.
• Das Protein enthält Coiled-Coil- und SH3-Bindungsdomänen, die Protein-Protein-Interaktionen vermitteln, die für die Zytoskelettorganisation und Zellmotilität essentiell sind.
• VASP trägt auch zur Aktin-basierten Motilität von Krankheitserregern wie Listeria monocytogenes in Wirtszellen bei.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da das Immunogen ein synthetisches Phospho-Peptid ist, sollten Phosphatase-Inhibitoren während der Probenvorbereitung verwendet werden, um die Phosphorylierungsmarkierungen für eine genaue Detektion zu erhalten.
• Validieren Sie die Phospho-Spezifität im Western Blot durch Behandlung von Proben mit Lambda-Phosphatase; ein Signalverlust bestätigt die Abhängigkeit von der S239-Phosphorylierung.
• Für IHC-P optimieren Sie die Antigen-Retrieval-Bedingungen schonend, da übermäßige Hitze die Phosphatgruppe stören kann; erwägen Sie die Verwendung einer Niedertemperatur-Retrieval-Methode.
• Überprüfen Sie die Sequenzhomologie der Peptidregion in Maus und Ratte, um die erwartete Kreuzreaktivität zu bestätigen; leichte Abweichungen können die Bindungsaffinität beeinflussen.
• Führen Sie immer nicht-phosphorylierte und phosphorylierte Kontrollen parallel, um Gesamtprotein von phosphorylierten Signalen zu unterscheiden.

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