Anti-Phospho-Ubiquitin-Ser65 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P62979 / P62987 / P0CG47 / P0CG48

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Ubiquitin-Funktion und -Lokalisierung

• Ubiquitin ist ein hochkonservatives Protein aus 76 Aminosäuren, das von vier Genen exprimiert wird (RPS27A, UBA52, UBB, UBC) und Fusionsproteine (z. B. Ubiquitin-ribosomales Protein eS31 und eL40) sowie Polyubiquitin-Vorläufer liefert.
• Es wirkt als posttranslationale Modifikation durch kovalente Konjugation an Lysinreste von Zielproteinen und bildet monomere oder Polyubiquitin-Ketten. Verschiedene Verknüpfungstypen (Lys-6, -11, -29, -33, -48, -63 und linear) bestimmen diverse zelluläre Ergebnisse, einschließlich proteasomalem Abbau (Lys-48), DNA-Reparatur (Lys-6/63), Endozytose und NF-κB-Signalisierung (Lys-63).
• Als Fusion mit dem ribosomalen Protein eS31 ist Ubiquitin ein integraler Bestandteil der 40S-ribosomalen Untereinheit und essentiell für die Assembly des Prozessoms der kleinen Untereinheit und die Ribosomogenese. Verwandte Referenzen: PMID:23636399 PMID:9582194 PMID:34516797
• Ubiquitin lokalisiert überwiegend im Zytoplasma und Kern, einschließlich des Nukleolus, was seinen Rollen beim Proteinabbau, der Signalisierung und der Ribosomogenese entspricht.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung an Ser65, Acetylierung und ADP-Ribosylierung, regulieren Struktur und Funktion von Ubiquitin. Die Phosphorylierung an Ser65 moduliert spezifisch die Ubiquitin-Kettenassembly und ist an Mitophagie und angeborener Immunsignalisierung beteiligt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blots sollten Sie die Verwendung von Phosphatase-Inhibitoren in Lysepuffern in Betracht ziehen, um die Phosphorylierung an Ser65 zu erhalten.
• Validieren Sie die Phospho-Spezifität, indem Sie Proben mit Lambda-Phosphatase behandeln; das Signal sollte nach der Dephosphorylierung verschwinden.
• Fügen Sie geeignete positive und negative Kontrollen hinzu (z. B. stimulierte vs. unstimulierte Zellen), um die Antikörperspezifität zu bestätigen.
• Optimieren Sie für ELISA die Konzentration des Beschichtungsantigens und die Antikörperverdünnung, um ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis zu erzielen.
• Beachten Sie, dass der Antikörper aufgrund der konservierten Sequenz um Ser65 Ubiquitin aller vier Gene erkennen kann; verwenden Sie bei Bedarf genspezifische Knockdowns.

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