Anti-Phospho-Src-Y529 Kaninchen-Monoklonaler Antikörper für WB und ELISA - P12931

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Src-Funktion und Lokalisierung

• Src ist ein Proto-Onkogen, das eine nicht-Rezeptor-Tyrosinkinase kodiert, die durch verschiedene Rezeptoren aktiviert wird und die Gen-Transkription, Immunantwort, Zelladhäsion, Zellzyklus, Apoptose und Migration steuert (PubMed:34234773). Verwandte Referenzen: PMID:34234773

• In Fokaladhäsionen phosphoryliert Src nach Integrin-Bindung PTK2/FAK1 und Paxillin und reguliert so Zelladhäsion und -migration (PubMed:21411625). Verwandte Referenzen: PMID:21411625

• Src trägt über die Phosphorylierung von AFAP1 und Cortactin (CTTN) zum Remodeling des Aktin-Zytoskeletts bei.

• SRC vermittelt die EGFR-Internalisierung durch Phosphorylierung der Clathrin-Schwerkette (CLTC) an Tyr-1477 (PubMed:18586953). Verwandte Referenzen: PMID:18586953

• In Osteoklasten ist Src durch Bildung eines Komplexes mit PTK2B/PYK2 und Phosphorylierung von CBL zur Aktivierung des PI3K-Signalwegs essentiell für die Knochenresorption (PubMed:14585963, PubMed:8755529). Verwandte Referenzen: PMID:14585963 PMID:8755529

• Src lokalisiert an der Zellmembran, in Fokaladhäsionen, im Zytoplasma, im Zytoskelett, im Zellkern, in der inneren Mitochondrienmembran und in der perinukleären Region.

• Ubiquitär exprimiert, mit höchsten Konzentrationen in Thrombozyten, Neuronen und Osteoklasten; auch in der Haut nachgewiesen (PubMed:22294297). Verwandte Referenzen: PMID:22294297

• Die Src-Kinaseaktivität wird streng durch Phosphorylierung kontrolliert, wobei Autophosphorylierung an Tyr-419 in der Aktivierungsschleife die Aktivität fördert (By similarity).

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für den Western Blot denaturierende und reduzierende Bedingungen verwenden; das erwartete Molekulargewicht beträgt etwa 60 kDa. Phosphatase-Inhibitoren während der Probenvorbereitung zusetzen, um die Phosphorylierung an Y529 zu erhalten.
• Im ELISA kann das phosphorylierte Peptid-Immunogen als Beschichtungsantigen verwendet werden, und die Spezifität sollte durch Parallel-Tests mit einem nicht-phosphorylierten Kontrollpeptid bestätigt werden.
• Reaktivität in humanen Zelllinien validieren, von denen bekannt ist, dass sie Src exprimieren (z. B. HeLa oder A549) unter Bedingungen, die die Y529-Phosphorylierung stimulieren, wie Serumentzug gefolgt von Pervanadat-Behandlung.
• Antikörperverdünnungen für jede Anwendung empirisch optimieren; üblicherweise liegen Startverdünnungen für WB zwischen 1:500 und 1:2000, aber die endgültigen Arbeitskonzentrationen müssen vom Endanwender bestimmt werden.

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