Anti-Phospho-SMO (S611/S615) Kaninisches polyklonales Antikörper für WB, ELISA - Q99835

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von SMO

• SMO (Smoothened) ist ein G-Protein-gekoppelter Rezeptor und ein zentraler Signalgeber des Hedgehog-Signalwegs, der für die embryonale Entwicklung und die Gewebehomöostase im Erwachsenenalter unerlässlich ist.
• In Abwesenheit von Hedgehog-Liganden wird SMO durch den Patched-Rezeptor (PTCH1/PTCH2) gehemmt, der den Cholesterinzugang zu SMO einschränkt; die Bindung von Hedgehog an Patched hebt diese Hemmung auf, wodurch SMO zur Primärzilie transloziert und durch Cholesterin aktiviert werden kann. Verwandte Referenzen: PMID:27437577 PMID:28344083 PMID:32929279
• Nach der Aktivierung koppelt SMO an das G-Protein G(i), hemmt die Adenylatcyclase und senkt den cAMP-Spiegel; dies dereprimiert die Proteinkinase A (PKA), was zur Stabilisierung und Aktivierung von GLI-Transkriptionsfaktoren führt. Verwandte Referenzen: PMID:28344083 PMID:31168089
• Aktives SMO kann PKA auch direkt hemmen, indem es seine katalytische Untereinheit PRKACA an der Zellmembran bindet und sequestriert, wodurch die Phosphorylierung und Prozessierung von GLI-Transkriptionsfaktoren verhindert wird. Verwandte Referenzen: PMID:36202993 PMID:39138140
• SMO lokalisiert hauptsächlich an der Zellmembran und der Membran der Primärzilie, einem zentralen Kompartiment für den Hedgehog-Signalweg.
• Der Antikörper erkennt spezifisch die Phosphorylierung an den Serinresten 611 und 615, posttranslationale Modifikationen, die wahrscheinlich die Konformation, Aktivität oder den Transport von SMO beeinflussen.
• Mutationen in SMO werden mit verschiedenen Entwicklungsstörungen und Krebserkrankungen in Verbindung gebracht, was seine zentrale regulatorische Rolle unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid im Bereich von Ser611/Ser615 des menschlichen SMO; für den Western Blot ist eine Bande bei ca. 86 kDa zu erwarten. Um die Phosphospezifität zu bestätigen, empfehlen sich eine Behandlung der Proben mit Lambda-Phosphatase oder die Verwendung eines nichtphosphorylierten Peptid-Konkurrenten.
• Da der Phosphorylierungsstatus von SMO dynamisch sein kann, ist die Zugabe von Phosphatase-Inhibitor-Cocktails während der Lyse empfehlenswert; verwenden Sie außerdem geeignete Positiv- und Negativkontrollen (z. B. Hedgehog-stimulierte vs. nicht stimulierte Zellen).
• Für die Western Blot Detektion kann eine Optimierung von Blockierung und Antikörperverdünnung erforderlich sein; testen Sie einen Konzentrationsbereich und validieren Sie in menschlichen Zelllinien oder Geweben mit aktivem Hedgehog-Signalweg (z. B. SHH-behandelte Fibroblasten).
• Für die ELISA ist der Antikörper möglicherweise geeignet, um phosphorylierte SMO-Peptide oder Zelllysate nachzuweisen; bestätigen Sie die Bindung mit einem phosphospezifischen Peptid und einer nichtphosphorylierten Kontrolle, um die Spezifität zu beurteilen.

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