Anti-Phospho-Smad5 (S463/S465) Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q99717

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Smad5-Funktion und -Lokalisierung

• SMAD5 ist ein Mitglied der SMAD-Familie von intrazellulären Signalübertragern und transkriptionellen Modulatoren, auch bekannt als JV5-1, Mothers against decapentaplegic Homolog 5 oder MADH5.
• Nach Bindung eines BMP-Liganden wird SMAD5 an konservierten C-terminalen Serinen (einschließlich S463 und S465) durch aktivierte BMP-Rezeptoren vom Typ I phosphoryliert, assoziiert sich dann mit SMAD4, um einen heteromeren Komplex zu bilden, der in den Kern transloziert, um die Expression der Zielgene zu regulieren. Verwandte Referenzen: PMID:9442019, PMID:33510867
• Als Transkriptionsfaktor erkennt phosphoryliertes SMAD5 Smad-Bindungselemente (SBEs) in Genpromotoren, um diverse zelluläre Prozesse wie embryonale Entwicklung, Zelldifferenzierung, Angiogenese und Gewebshomöostase zu modulieren. Verwandte Referenzen: PMID:12064918, PMID:16516194
• In seinem nicht-phosphorylierten Zustand wirkt SMAD5 im Zytoplasma, indem es den Energiestoffwechsel beeinflusst, durch Interaktion mit Hexokinase 1 (HK1) die Glykolyse beschleunigt und die mitochondriale Atmung als Reaktion auf Veränderungen des zytoplasmatischen pH-Werts fördert. Verwandte Referenzen: PMID:28675158
• SMAD5 lokalisiert überwiegend im Zytoplasma und Kern, aber auch im Mitochondrium, was seine multifunktionalen Rollen widerspiegelt.
• Das Protein ist ubiquitär in Geweben exprimiert und unterliegt posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung und Acetylierung; es bindet DNA und Zinkionen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid um S463 und S465, was darauf hindeutet, dass der Antikörper spezifisch Smad5 erkennt, das an diesen BMP-Rezeptor-Zielstellen phosphoryliert ist. Ziehen Sie in Betracht, während der Probenvorbereitung Phosphatase-Inhibitoren zu verwenden, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• Für Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht 52 kDa; validieren Sie die Detektion in relevanten BMP-stimulierten Zelllysaten (z. B. Proben von Human, Maus, Ratte).
• Für Immunhistochemie (IHC-P) optimieren Sie die Antigen-Retrieval und validieren Sie in Gewebeschnitten, in denen die BMP-Signalgebung aktiv ist; ziehen Sie die Verwendung von Isotyp-Kontrollen in Betracht, um die Spezifität zu bestätigen.
• Dieser Antikörper kann mit nicht-phosphoryliertem Smad5 oder anderen Smad-Familienmitgliedern kreuzreagieren; überprüfen Sie die Spezifität durch Vergleich der Signale in stimulierten vs. unstimulierten Proben oder durch Verwendung spezifischer Inhibitoren.
• Im ELISA verwenden Sie eine Phospho-Peptid-Kompetition, um die Phospho-Spezifität zu bestätigen, und kalibrieren Sie mit bekannten Standards.

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