Anti-Phospho-Smad3-T179 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P84022

Kern-Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: SMAD3-Funktion und -Lokalisierung

• SMAD3 (SMAD-Familienmitglied 3) ist ein rezeptorreguliertes SMAD (R-SMAD) und intrazellulärer Signaltransduktor, auch bekannt als JV15-2, MAD-Homolog 3 (Mad3) und hMAD-3. Es vermittelt transkriptionelle Antworten stromabwärts von TGF-beta- und Activin-Rezeptorkinasen.
• Nach Phosphorylierung und Aktivierung durch Typ-1-Rezeptorkinasen bindet SMAD3 an das TRE-Element in den Promotorregionen von TGF-beta-antwortenden Genen und aktiviert in Komplex mit SMAD4 die Transkription.
• Darüber hinaus kann SMAD3 einen SMAD3/SMAD4/JUN/FOS-Komplex an AP-1/SMAD-Stellen bilden, um die Transkription zu regulieren und TGF-beta-Signale mit anderen Signalwegen zu integrieren.
• SMAD3 spielt eine hemmende Rolle bei der Wundheilung, indem es das Wachstum und die Migration von Keratinozyten sowie die TGF-beta-vermittelte Monozytenchemotaxis moduliert; dieser Effekt ist hormonsensitiv.
• Es wirkt als Regulator der Chondrogenese und Osteogenese und hemmt die frühe Heilung von Knochenfrakturen.
• SMAD3 reguliert die PDPK1-Kinaseaktivität positiv, indem es dessen Dissoziation vom hemmenden 14-3-3-Protein YWHAQ fördert.
• Subzellulär lokalisiert sich SMAD3 sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern und wechselt je nach Signalreiz zwischen diesen Kompartimenten.
• Das Protein unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung (z. B. an Thr179), Acetylierung, ADP-Ribosylierung und Ubiquitinierung, die seine Aktivität und Stabilität modulieren. Es enthält auch Zink-bindende Motive und ist alternativem Spleißen unterworfen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting (WB) verwenden Sie phosphospezifische Bedingungen mit Phosphatase-Inhibitor-Cocktails und validieren die Spezifität mithilfe eines nicht-phosphorylierten Peptidkontrollen oder einer Phosphatase-Behandlung der Proben.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) ist möglicherweise eine Antigen-Retrieval erforderlich, und die phosphospezifische Färbung sollte durch einen Vergleich mit der Gesamt-SMAD3-Färbung in benachbarten Schnitten bestätigt werden.
• Für ELISA-Anwendungen fügen Sie eine Standardkurve mit phosphoryliertem Peptid ein und überprüfen Sie mit nicht-phosphoryliertem Peptid, um die Phosphospezifität sicherzustellen.
• Der Antikörper kreuzreagiert mit murinem und rattem SMAD3, es wird jedoch empfohlen, die Homologie der Zielsequenz zu validieren und Pilotexperimente im relevanten Probensystem durchzuführen.

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