Anti-Phospho-Smad3 (S423/S425) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P84022

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Phospho-Smad3 (S423/S425) Funktion und Lokalisierung

• SMAD3 (Mothers against decapentaplegic homolog 3) ist ein Rezeptor-reguliertes SMAD (R-SMAD) Protein, das als intrazellulärer Signaltransduktor für TGF-beta- und Aktivin-Signalwege fungiert.
• Nach Phosphorylierung an S423 und S425 durch Typ-1-Rezeptorkinasen bildet SMAD3 einen Komplex mit SMAD4 und translokiert in den Zellkern, um an das TRE-Element zu binden und die Transkription von Zielgenen zu aktivieren.
• SMAD3 kann auch einen Komplex mit SMAD4, JUN und FOS an AP-1/SMAD-Stellen bilden und so TGF-beta-Signalgebung mit anderen Signalwegen integrieren.
• Es spielt eine regulatorische Rolle bei der Wundheilung, wo es das Wachstum und die Migration von Keratinozyten zu hemmen scheint und die Chemotaxis von Monozyten mit hormonsensitiven Effekten verändert.
• SMAD3 reguliert die PDPK1-Kinaseaktivität positiv, indem es dessen Dissoziation vom inhibitorischen 14-3-3-Protein YWHAQ fördert.
• Das Protein ist sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern lokalisiert und pendelt als Antwort auf Signale zwischen diesen Kompartimenten.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Acetylierung, ADP-Ribosylierung und Ubiquitinierung, wobei die Phosphorylierung am C-terminalen SSXS-Motiv entscheidend für die Aktivierung ist.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting: Verwenden Sie phospho-spezifische Lysepuffer und schließen Sie Phosphatase-Inhibitoren ein, um die S423/S425-Phosphorylierung zu erhalten.
• Überprüfen Sie die Bandenspezifität durch Behandlung von Zelllysaten mit Lambda-Phosphatase oder durch Wettbewerb mit einem nicht-phosphorylierten Peptid.
• Bei der Durchführung von IHC-P: Optimieren Sie die Bedingungen für die Antigen-Demaskierung und ziehen Sie Methoden zur Phospho-Epitop-Demaskierung in Betracht.
• Für ELISA: Kombinieren Sie mit einem Gesamt-SMAD3-Antikörper, um das Verhältnis von phosphoryliertem zu Gesamtprotein zu quantifizieren.

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