Polyclonaler Anti-Phospho-Smad2 (Ser467)-Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – Q15796

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von SMAD2

• SMAD2 (SMAD-Familienmitglied 2), auch bekannt als JV18-1, MADH2 oder hMAD-2, ist ein rezeptorgesteuertes SMAD (R-SMAD), das als intrazellulärer Signaltransduktor und Transkriptionsmodulator stromabwärts von TGF-beta- und Activin-Typ-1-Rezeptorkinasen fungiert.
• Nach der Ligandenbindung wird SMAD2 phosphoryliert und bildet einen Komplex mit SMAD4. Dieser Komplex transloziert in den Zellkern, bindet an das TRE-Element in Promotoren von Zielgenen und aktiviert die Transkription, wodurch es vielfältige zelluläre Prozesse reguliert.
• SMAD2 reguliert die PDPK1-Kinaseaktivität positiv, indem es die Dissoziation von dem inhibitorischen 14-3-3-Protein YWHAQ fördert, und beeinflusst dadurch nachgeschaltete Signalwege.
• Wie funktionelle Studien nahelegen, kann es als Tumorsuppressor bei kolorektalen Karzinomen wirken. Verwandte Referenzen: PMID:8752209
• SMAD2 fördert die TGFB1-vermittelte Transkription von odontoblastischen Differenzierungsgenen in Zahnpapillazellen, was eine Rolle bei der gewebespezifischen Differenzierung unterstreicht.
• Die subzelluläre Lokalisation ist in Abwesenheit eines Signals hauptsächlich zytoplasmatisch, nach Phosphorylierung transloziert das Protein jedoch in den Zellkern. Der Transport zwischen Zytoplasma und Zellkern erfolgt in abhängigkeit von der Phosphorylierung.
• SMAD2 wird breit exprimiert, mit hohen Gehalten in Skelettmuskel, Endothelzellen, Herz und Plazenta – was mit seiner Rolle bei kardiovaskulären und entwicklungsbiologischen Signalen übereinstimmt.
• Das Protein erfährt multiple posttranslationale Modifikationen, darunter Phosphorylierung (entscheidend für die Aktivierung), Acetylierung und Ubiquitinierung. Es handelt sich zudem um ein zinkbindendes Phosphoprotein mit einem Molekulargewicht von etwa 52,3 kDa.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Als Immunogen wurde ein synthetisches phosphoryliertes Peptid im Bereich um Ser467 des humanen SMAD2 verwendet. Um die Detektion der phosphorylierten Form zu gewährleisten, sollten Sie bei der Probenvorbereitung die Zugabe von Phosphataseinhibitoren erwägen.
• Für die Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von SMAD2 ~52 kDa. Beobachten Sie Banden bei dieser Größe; zusätzliche Banden können Isoformen oder posttranslationale Modifikationen darstellen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) optimieren Sie die Bedingungen zur Antigenrückgewinnung, da phosphorylierungsspezifische Antikörper empfindlich auf Fixierungsmethoden reagieren können.
• Bei ELISA kann der Antikörper für die phosphospezifische Detektion eingesetzt werden; eine Kombination mit einem Gesamt-SMAD2-Antikörper kann die Bestimmung der Phosphorylierungsstöchiometrie ermöglichen.
• Validieren Sie die Spezifität des Antikörpers in der relevanten Art und Probe unter Verwendung geeigneter positiver und negativer Kontrollen (z. B. mit Phosphatase behandelte Lysate für WB).

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