Anti-Phospho-SMAD1-S463/S465+SMAD5-S463/S465+SMAD9-S465/S467 Kaninchen mAb für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA – Q15797/Q99717/O15198

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von SMAD1

• SMAD1 (Mothers against decapentaplegic Homolog 1, auch bekannt als BSP1, JV4-1, MADH1) gehört zur intrazellulären Mediatorfamilie der SMAD-Transkriptionsfaktoren.
• Nach der Bindung des BMP-Liganden wird SMAD1 an Ser463/465 durch aktivierte BMP-Typ-I-Rezeptoren phosphoryliert, bildet dann einen Komplex mit SMAD4 und wandert in den Zellkern. Zugehörige Referenzen: PMID:9335504 PMID:33667543
• Im Zellkern bindet der SMAD1/SMAD4-Komplex an Smad-Bindeelemente (SBEs), um die Transkription von Zielgenen zu regulieren, die an der Embryonalentwicklung, Zelldifferenzierung und Gewebehomöostase beteiligt sind.
• SMAD1 vermittelt den Abbau des CREBBP/EP300-Repressors SNIP1 über einen OAZ1/PSMB4-Komplex, was die Genexpression weiter moduliert (nach Ähnlichkeit).
• Subzellulär befindet sich SMAD1 sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern, wobei die Translokation in den Zellkern von der BMP-induzierten Phosphorylierung abhängig ist.
• Die Expression ist ubiquität, mit den höchsten Werten in Herz und Skelettmuskel.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung (Aktivierung), Acetylierung und Ubiquitinierung; das Protein weist zudem zinkbindende Motive auf.
• Schlüsselwörter aus UniProt: 3D-Struktur, Acetylierung, alternatives Spleißen, DNA-bindend, metallbindend, Phosphoprotein, Transkriptionsregulation, Ubl-Konjugation, Zink.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Der Antikörper wurde gegen ein synthetisches Phosphopeptid erhoben, das das konservierte Phosphorylierungsmotiv (SSVS) in SMAD1, SMAD5 und SMAD9 umfasst; bestätigen Sie die Spezifität durch einen Vergleich von BMP-behandelten und unbehandelten Zelllysaten im Western Blot.
• Für Western Blot laden Sie entsprechend behandelte Lysate auf und fügen Sie bei der Probenvorbereitung Phosphataseinhibitoren hinzu; die erwartete Bandengröße beträgt etwa 52 kDa, aber Phosphorylierung kann zu leichten Verschiebungen führen.
• Für IHC-P und IF/ICC validieren Sie den Antikörper mit Positiv- und Negativkontrollgeweben/-zellen, in denen die BMP-Signalgebung bekanntermaßen aktiv oder inaktiv ist; Kernfärbung weist auf aktivierte SMAD-Komplexe hin.
• Bei ELISA titrieren Sie den Antikörper gegen phosphorylierte und nicht phosphorylierte Peptide, um die Phosphospezifität zu überprüfen.
• Kreuzreaktivität wird für Mensch, Maus und Ratte berichtet; überprüfen Sie vor der Verwendung mit anderen Arten die artspezifische Sequenzausrichtung um die Phosphorylierungsstellen herum.

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