Anti-Phospho-S6 Ribosomal Protein (RPS6)-S240/244 Kaninchen-pAk für WB, IHC-P, IP, ELISA - P62753

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: RPS6-Funktion und Lokalisierung

• RPS6 kodiert das 40S ribosomale Protein S6 (auch bekannt als Phosphoprotein NP33), eine Kernkomponente der kleinen (40S) ribosomalen Untereinheit.
• Essentiell für die Kontrolle von Zellwachstum und Proliferation durch selektive Translation von mRNA-Klassen, insbesondere solche mit 5'-terminalen Oligopyrimidin-(TOP)-Motiven. Verwandte Referenzen: PMID:17220279
• Während der Ribosom-Biogenese ist RPS6 Teil des Small-Subunit-(SSU)-Prozessoms im Nukleolus und trägt zum Falten, Modifizieren und Verarbeiten der prä-rRNA bei. Verwandte Referenzen: PMID:34516797
• Die subzelluläre Lokalisierung erstreckt sich über das Zytoplasma, den Kern und den Nukleolus, was die dualen Rollen bei der mRNA-Translation und der Ribosomen-Zusammenbau widerspiegelt.
• Unterliegt umfangreichen post-translationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung an mehreren Resten (z. B. Ser240/244), Acetylierung, ADP-Ribosylierung und Hydroxylierung; die Phosphorylierung ist entscheidend für die Translationsregulation.
• Klassifiziert als Phosphoprotein, Ribonukleoprotein und Teil des Referenzproteoms; weitgehend untersucht als downstream-Effektor der mTOR-Signalgebung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Da das Immunogen ein synthetisches Phospho-Peptid ist, das phosphoryliertem Ser240 und Ser244 entspricht, wird erwartet, dass der Antikörper RPS6 spezifisch nur nach dualer Phosphorylierung detektiert. Validieren Sie die Spezifität durch einen Vergleich der Signale von behandelten gegenüber unbehandelten Zellen oder durch Verwendung einer Phosphatase-Behandlung.
• Für Western Blotting verwenden Sie Lysepuffer, die die Phosphorylierung erhalten, ergänzt mit Phosphatase-Inhibitoren. Optimieren Sie die Antikörperverdünnung (z. B. 1:500–1:2000) in einer relevanten Zelllinie, die mit Serum oder Wachstumsfaktoren stimuliert wurde, um die RPS6-Phosphorylierung zu induzieren.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) können die Bedingungen der Antigen-Retrieval die Epitop-Zugänglichkeit beeinflussen. Fügen Sie immer sowohl positive (stimuliertes Gewebe) als auch negative (nicht-phosphoryliertes Blockierpeptid) Kontrollen ein.
• Für die Immunpräzipitation (IP) sollten Sie eine Vernetzung des Antikörpers an die Perlen in Betracht ziehen, um Störungen durch die schweren und leichten Ketten bei ~29 kDa zu vermeiden. ELISA kann zur Quantifizierung von Phospho-RPS6 in Zelllysaten verwendet werden, bestätigen Sie jedoch die Linearität und Spezifität.

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