Anti-Phospho-RPS6KA5-S376 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - O75582

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RPS6KA5-Funktion und Lokalisierung

• RPS6KA5, auch bekannt als MSK1 oder 90 kDa ribosomales Protein S6 Kinase 5, ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase mit einem Molekulargewicht von etwa 90 kDa. Sie gehört zur RSK-Familie und spielt eine entscheidende Rolle bei der Signaltransduktion von der Zelloberfläche zum Zellkern.
• Vermittelt die Mitogen- und Stress-induzierte Phosphorylierung der Transkriptionsfaktoren CREB1 und ATF1 und reguliert so deren transkriptionelle Aktivität. Dies geschieht als Reaktion auf Stimuli wie UV-C, EGF und Anisomycin. Verwandte Referenzen: PMID:11909979 PMID:9873047
• Essentiell für die Kontrolle der RELA (NF-kB p65) transkriptionellen Aktivität als Reaktion auf TNF und Glukokortikoide, was zur Unterdrückung der Expression entzündungsfördernder Gene beiträgt. In Skelettmuskel-Vorläuferzellen phosphoryliert es RELA an Ser-276 während oxidativen Stresses. Verwandte Referenzen: PMID:12628924 PMID:18511904
• Moduliert direkt die Chromatinstruktur durch Phosphorylierung von Histon H3 an Ser-10 und möglicherweise Ser-28 sowie von Histon H2A an Ser-1. Die Histon H3-Phosphorylierung fördert die transkriptionelle Aktivierung von Immediate-Early-Genen wie c-fos und c-jun. Verwandte Referenzen: PMID:12773393 PMID:15010469
• Phosphoryliert und reguliert mehrere andere Substrate, darunter STAT3 (an Ser-727), den Transkriptionsfaktor ETV1/ER81 (an Ser-191 und Ser-216), das High-Mobility-Group-Protein HMGN1 und die Ubiquitin-Ligase TRIM7 (an Ser-107). Verwandte Referenzen: PMID:12763138 PMID:12569367 PMID:25851810
• Lokalisiert sowohl im Zellkern als auch im Zytoplasma, was es ihr ermöglicht, Signale von zytoplasmatischen Kinasen-Kaskaden zu nukleären Zielen zu übertragen.
• Weit verbreitet in Geweben exprimiert, mit höchsten Konzentrationen in Herz, Gehirn und Plazenta; niedrigere Konzentrationen in Lunge, Niere und Leber.
• Funktioniert in der negativen Rückkopplungsregulation von Entzündungsreaktionen in Makrophagen durch Begrenzung der Produktion proinflammatorischer Zytokine über den TLR4-Signalweg, wahrscheinlich durch Induktion von DUSP1 und IL10.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das Ser376 von humanem RPS6KA5 entspricht. Dieses Design führt wahrscheinlich zu einem Antikörper, der spezifisch für die phosphorylierte Form ist; die Spezifität sollte durch Behandlung von Proben mit Lambda-Phosphatase oder durch Verwendung eines nicht-phosphorylierten Peptid-Konkurrenten in Blockierungsexperimenten überprüft werden.
• Für Western-Blot (WB)-Anwendungen sollten Phosphatase-Inhibitoren in den Lysepuffern enthalten sein, um das Phosphorylierungssignal zu erhalten. Die vorhergesagte Bandengröße beträgt ~90 kDa; dies sollte anhand geeigneter Molekulargewichtsmarker bestätigt werden.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) können die Antigen-Retrieval-Bedingungen und der Nachweis der Phospho-spezifischen Epitope Optimierung erfordern. Verwenden Sie bekannte positive Kontrollgewebe mit hoher RPS6KA5-Expression, wie z.B. Gehirn oder Herz.
• Für ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden; die Kombination mit einem nicht-phospho-spezifischen Gegenstück könnte eine quantitative Bewertung der Phosphorylierungsgrade ermöglichen. Validieren Sie dies im relevanten Proben-System.

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