Anti-Phospho-RPA2-Ser33 Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IF-P, IHC-P, ELISA – P15927

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation der 32 kDa-Untereinheit des Replikationsproteins A

• RPA2 ist die 32 kDa-Untereinheit des heterotrimeren Replikationsprotein-A (RPA)-Komplexes, der zudem RPA1 (70 kDa) und RPA3 (14 kDa) umfasst. Es ist auch bekannt als Replikationsfaktor-A Protein 2 (RF-A Protein 2) und RP-A p34.
• Der RPA-Komplex bindet und stabilisiert einzelsträngige DNA (ssDNA) während der DNA-Replikation und nach DNA-Schäden, verhindert eine erneute Anlagerung und rekrutiert Schlüsselproteine für den DNA-Stoffwechsel.
• Bei der DNA-Schadensantwort erleichtert RPA2 die Rekrutierung von ATRIP, das die ATR-Kinase aktiviert – ein Hauptregulator der Checkpoint-Signalgebung.
• RPA2 ist essenziell für die Rekrutierung von DNA-Reparaturfaktoren wie RAD51, RAD52, XPA und XPG an Chromatin an den Stellen von DNA-Schäden und ermöglicht so homologe Rekombination und Nukleotid-Exzisionsreparatur.
• Der Komplex spielt ebenfalls eine Rolle bei der Basen-Exzisionsreparatur (BER), wahrscheinlich durch Interaktion mit UNG, und stimuliert die 5'-3'-Helikase-Aktivität von BRIP1/FANCJ, um den Neustart von Replikationsgabeln zu fördern. Verwandte Referenzen: PMID:17596542
• RPA2 lokalisiert überwiegend im Zellkern und kann in PML-Kernkörpern nachgewiesen werden.
• Posttranslationale Modifikationen – einschließlich der Phosphorylierung an Ser33, Acetylierung und Ubiquitinierung – regulieren die Funktionen von RPA2 bei der DNA-Reparatur und Replikation.
• Alternatives Spleißen von RPA2 ergibt mehrere Isoformen, die zur funktionellen Vielfalt beitragen.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Für den Western Blot (WB) validieren Sie die Phosphospezifität durch den Vergleich der Signale zwischen behandelten und unbehandelten Proben oder durch eine Behandlung mit Lambda-Phosphatase.
• Bei Immunfluoreszenz (IF-P) und Immunhistochemie (IHC-P) optimieren Sie die Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen, um das Phosphorylierungsepitop zu erhalten, da eine übermäßige Fixierung das Ziel maskieren kann.
• Bei der Verwendung von ELISA erwägen Sie die Paarung dieses phosphospezifischen Antikörpers mit einem Gesamt-RPA2-Antikörper, um die Proteinbeladung zu normalisieren und die Phosphorylierungsstöchiometrie zu bestimmen.
• Obwohl der Antikörper kreuzreaktiv mit RPA2 von Maus und Ratte ist, bestätigen Sie die Sequenzhomologie um Ser33 bei diesen Spezien, um eine konsistente Erkennung sicherzustellen.

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