Anti-Phospho-RIPK1 (S166) Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q13546

Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation der Rezeptor-interagierenden Serin/Threonin-Proteinkinase 1

• RIPK1, auch bekannt als RIP, RIP-1 oder Zelltodprotein RIP, ist eine Serin-Threonin-Kinase, die vom RIPK1-Gen kodiert wird; alternatives Spleißen erzeugt mehrere Proteinisoformen.
• Es dient als Schlüsselregulator für TNF-vermittelte Apoptose, Nekroptose und Entzündungswege. Zugehörige Referenzen: PMID:17703191, PMID:24144979, PMID:31827280.
• RIPK1 weist kinaseaktivitätsabhängige Funktionen auf, die den Zelltod steuern, sowie kinaseunabhängige Gerüstfunktionen, die Entzündungssignale und das Zellüberleben fördern. Zugehörige Referenzen: PMID:11101870, PMID:19524512, PMID:19524513.
• Nach TNF-Stimulation wird RIPK1 in den TNF-R1-Signalkomplex (Komplex I) rekrutiert, wo es als Gerüst fungiert, um kanonisches NF-κB zu aktivieren und das Zellüberleben zu fördern.
• Die Kinaseaktivität von RIPK1 treibt den Zusammenbau von todesinduzierenden Komplexen voran: Komplex IIa (RIPK1-FADD-CASP8) für Apoptose und Komplex IIb (RIPK1-RIPK3-MLKL) für Nekroptose.
• RIPK1 phosphoryliert RIPK3, was zu einer gegenseitigen Auto- und Transphosphorylierung führt. Zugehörige Referenzen: PMID:19524513.
• Es phosphoryliert DAB2IP an Ser-728 und aktiviert dadurch die MAP3K5-JNK-Apoptosekaskade. Zugehörige Referenzen: PMID:15310755, PMID:17389591.
• Subzellulär findet sich RIPK1 im Zytoplasma und ist mit der Zellmembran assoziiert; es unterliegt Phosphorylierung, Ubiquitinierung und anderen posttranslationalen Modifikationen, die seine Signalfunktionen regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das den Resten um Serin 166 von humanem RIPK1 entspricht; daher erkennt der Antikörper spezifisch RIPK1, wenn es an dieser Stelle phosphoryliert ist.
• Verwenden Sie für Western Blotting Lysate aus humanen Zelllinien oder Geweben, da berichtet wird, dass der Antikörper mit humanem RIPK1 reagiert; erwägen Sie die Zugabe von Phosphatase-Inhibitoren während der Probenvorbereitung, um die Phosphorylierung zu erhalten.
• ELISA-Anwendungen erfordern möglicherweise eine Optimierung der Beschichtungsbedingungen und des Nachweises von phosphoryliertem RIPK1 in Zelllysaten oder rekombinantem Protein; validieren Sie mit Positiv- und Negativkontrollen für die Phosphorylierung.
• Das vorhergesagte Molekulargewicht von RIPK1 beträgt ~75 kDa; posttranslationale Modifikationen können jedoch zu leichten Verschiebungen in der Migration führen.

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