Anti-Phospho-RB1 (S780) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - P06400

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RB1-Funktion und -Lokalisierung

• Retinoblastoma-assoziiertes Protein (RB1) ist ein wichtiger Tumorsuppressor und Zellzyklusregulator, der den G1/S-Übergang und den G0-G1-Fortschritt kontrolliert. Seine Aktivität wird durch den Phosphorylierungsstatus gesteuert.
  Verwandte Referenzen: PMID:10499802 PMID:15084261
• Hypophosphoryliertes RB1 bindet und hemmt E2F-Transkriptionsfaktoren und blockiert die Transkription von Genen, die für den Eintritt in die S-Phase erforderlich sind. Es maskiert sowohl physisch die E2F-Transaktivierungsdomäne als auch rekrutiert chromatinmodifizierende Repressoren.
  Verwandte Referenzen: PMID:10499802
• RB1 trägt direkt zur Bildung und Aufrechterhaltung von Heterochromatin bei, indem es die Histaminmethylierung stabilisiert, insbesondere durch Rekrutierung von SUV39H1 und KMT5B/C zur Methylierung von H4K20 und durch Durchsetzung von konstitutivem Heterochromatin.
• Das Protein vermittelt auch die transkriptionelle Repression durch SMARCA4/BRG1, indem es Histondeacetylase (HDAC)-Komplexe an Promotoren wie c-FOS bindet. In Neuronen wird diese Repression durch calciumabhängige Dephosphorylierung von RB1 aufgehoben.
• Virale Onkoproteine (SV40 großes T-Antigen, HPV E7, Adenovirus E1A) zielen auf RB1 ab, lösen den RB1-E2F-Komplex auf und treiben den Eintritt der Wirtszelle in die S-Phase voran.
• Subzellulär befindet sich RB1 hauptsächlich im Zellkern, wo es seine transkriptionsregulatorischen Funktionen ausübt, kann aber auch im Zytoplasma lokalisiert werden.
• Wird in der Retina und in Vorhautkeratinozyten exprimiert, mit zusätzlicher Expression in vielen Gewebetypen.
  Verwandte Referenzen: PMID:20940255
• Posttranslationale Modifikationen umfassen umfangreiche Phosphorylierung (z. B. an S780 durch cyclinabhängige Kinasen), Acetylierung und Methylierung, die gemeinsam seine Aktivität, Proteininteraktionen und Stabilität modulieren. Schlüsselwörter umfassen Chromatinregulator, Tumorsuppressor und Wirt-Virus-Interaktion.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser phosphospezifische kaninchen monoklonale Antikörper zielt auf den Phosphorylierungsort S780 auf RB1 ab; stellen Sie den Phosphorylierungsstatus der Probe sicher, indem Sie Zellen mit entsprechenden Stimuli (z. B. Serumstimulation, CDK4/6-Inhibitoren) behandeln und während der Lyse immer Phosphatase-Inhibitoren zufügen, um das Epitop zu erhalten.
• Für Western Blot beträgt die erwartete Bande ~106 kDa. Validieren Sie die Spezifität mithilfe einer Blockierungskontrolle mit einem nicht-phosphorylierten Peptid und vergleichen Sie die Signale in phosphataseten behandelten Lysaten mit unbehandelten Lysaten.
• Verwenden Sie bei ELISA synthetische Phospho- und Nicht-Phospho-Peptide als Beschichtungsantigene, um die Selektivität des Phosphorylierungszustands zu bestätigen.
• Eine Kreuzreaktivität wird für Mensch und Ratte berichtet; wenn Sie Mausproben verwenden, überprüfen Sie die Sequenzhomologie um S780 herum und führen Sie einen Pilotversuch durch.
• Optimieren Sie die Antikörperverdünnung empirisch, da keine validierte Arbeitskonzentration angegeben ist, und fügen Sie immer positive (z. B. proliferierende Krebszelllinien) und negative (z. B. RB1-null oder serumfreie) Kontrollen ein.

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