Anti-Phospho-RB (Ser780) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P06400

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RB1-Funktion und Lokalisierung

• Das Retinoblastom-assoziierte Protein (RB1) ist ein Tumorsuppressor und ein Schlüsselregulator des G1/S-Übergangs im Zellzyklus. Es wirkt, indem es an E2F-Transkriptionsfaktoren bindet und die Transkription von Genen, die für den Eintritt in die S-Phase benötigt werden, reprimiert. Verwandte Referenzen: PMID:10499802
• Die Phosphorylierung von RB1 durch cyclinabhängige Kinasen (CDKs) führt zur Dissoziation von E2F, wodurch die Transkription aktiviert und der Zellzyklusfortschritt gefördert wird. Verwandte Referenzen: PMID:10499802
• RB1 erleichtert auch den G0-G1-Übergang nach Phosphorylierung durch CDK3/Cyclin-C. Verwandte Referenzen: PMID:15084261
• Direkt an der Heterochromatinbildung beteiligt, indem es die Chromatinstruktur aufrechterhält und die Histonmethylierung stabilisiert, und Histonmethyltransferasen wie SUV39H1 rekrutiert.
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst den Zellkern und das Zytoplasma, was mit seinen Rollen in der Transkriptionsregulation und Zellzykluskontrolle übereinstimmt.
• Exprimiert in der Netzhaut und Vorhautkeratinozyten, mit breiter Gewebeverteilung, die seine grundlegende Zellzyklusfunktion widerspiegelt.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung, Acetylierung und Methylierung, die seine Aktivität und Interaktionen modulieren. Die Störung durch virale Onkoproteine (z.B. SV40 großes T-Antigen, HPV E7) verdeutlicht seine zentrale Rolle in der Wachstumskontrolle.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Phosphopeptid, das den Regionen um Ser780 des humanen RB entspricht. Um die Phospho-Spezifität zu bestätigen, schließen Sie Phosphatase-behandelte Lysate ein oder konkurrieren Sie mit nicht-phosphoryliertem Peptid in Ihrem Assay.
• Für Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht unter reduzierenden Bedingungen etwa 106 kDa. Verwenden Sie geeignete positive (z.B. sich teilende Zellen) und negative (z.B. serumverarmte oder RB-defiziente) Kontrollen, um die Bandenidentität zu verifizieren.
• Bei IHC-P sollten Antigen-Retrieval-Bedingungen (z.B. Citratpuffer pH 6.0 oder EDTA pH 9.0) und Antikörperverdünnung pro Gewebetyp optimiert werden. Eine Co-Färbung mit einem Gesamt-RB-Antikörper kann helfen, den Phosphorylierungsstatus im Gewebekontext zu beurteilen.
• Es wird berichtet, dass der Antikörper mit murinem und ratten RB kreuzreagiert; eine Validierung in der relevanten Spezies und im experimentellen System wird jedoch empfohlen.
• Für ELISA sollten Sie die Beschichtung mit phosphoryliertem Peptid in Betracht ziehen und die Spezifität gegen nicht-phosphoryliertes Peptid überprüfen.

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