Anti-Phospho-Raf1 (Ser621) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper - P04049

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RAF1-Funktion und Lokalisierung

• RAF1, auch bekannt als c-Raf oder Raf-1, ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die durch das RAF1-Gen kodiert wird. Sie fungiert als kritische regulatorische Verbindung zwischen membrangebundenen Ras-GTPasen und der MAPK/ERK-Signalkaskade und steuert wichtige zelluläre Prozesse wie Proliferation, Differenzierung, Apoptose und onkogene Transformation.
• Aktiviertes RAF1 phosphoryliert und aktiviert die dual-spezifischen Kinasen MAP2K1/MEK1 und MAP2K2/MEK2, die wiederum die extrazellulär signalregulierten Kinasen MAPK3/ERK1 und MAPK1/ERK2 phosphorylieren und so nachgeschaltete Signale weiterleiten.
• Jenseits des kanonischen MAPK-Signalwegs phosphoryliert RAF1 mehrere andere Substrate, darunter BAD (an Ser-75), Adenylylcyclasen (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A und TNNT2, was es mit verschiedenen zellulären Funktionen wie Apoptoseregulation und cAMP-Signalübertragung verbindet.
• RAF1 lokalisiert im Zytoplasma, an der Zellmembran, im Mitochondrium und im Zellkern. Seine Translokation zu Mitochondrien ermöglicht die Bindung an BCL2 und die Verdrängung von BAD, was einen zusätzlichen anti-apoptotischen Mechanismus bietet.
• In Skelettmuskeln ist Isoform 1 von RAF1 häufiger vorhanden als Isoform 2, was auf gewebespezifische regulatorische Rollen hindeutet.
• RAF1 ist ein Proto-Onkogen, das mit verschiedenen Krebsarten in Verbindung gebracht wird; seine fehlregulierte Aktivität fördert die onkogene Transformation, teilweise durch die Unterdrückung von Tight-Junction-Proteinen wie Occludin durch Hochregulierung von SNAI2/SLUG.
• Das Protein enthält eine Zinkfinger-Domäne und unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, die seine Kinaseaktivität und subzelluläre Verteilung streng regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wurde gegen ein synthetisches phosphoryliertes Peptid hergestellt, das Ser621 von humanem RAF1 entspricht. Es wird erwartet, dass er spezifisch phosphoryliertes RAF1 an dieser Stelle erkennt. Für den Nachweis von Gesamt-RAF1 kann ein Pan-Antikörper als Kontrolle erforderlich sein.
• Für Western Blot verwenden Sie Standardprotokolle, stellen Sie jedoch sicher, dass Phosphataseinhibitoren in den Lysis- und Inkubationspuffern enthalten sind, um die Phosphorylierung zu erhalten. Die Detektion einer Bande nahe 73 kDa wird in geeigneten humanen Proben erwartet.
• Für die Immunpräzipitation optimieren Sie die Antikörperkonzentration und die Inkubationszeit für Ihr experimentelles System. Vorreinigung und geeignete Isotypenkontrollen werden empfohlen.
• Für ELISA kann dieser Antikörper zur Bindung oder Detektion verwendet werden; validieren Sie die Bindungsaffinität und Spezifität mit phosphorylierten und nicht-phosphorylierten Peptidkontrollen.
• Validieren Sie den Antikörper immer in Ihrer spezifischen Probenmatrix und unter Ihren experimentellen Bedingungen; die Leistung kann je nach Zelltyp und Stimulationsstatus variieren.

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