Anti-Phospho-Raf1-S621 Kaninchen Monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - P04049

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von RAF1 (c-Raf)

• RAF1 (auch bekannt als c-Raf oder Raf-1) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die als kritische regulatorische Verbindung zwischen membranassoziierten Ras-GTPasen und der MAPK/ERK-Kaskade fungiert. Sie arbeitet als Schalter, der Zellschicksalsentscheidungen wie Proliferation, Differenzierung, Apoptose und Überleben steuert.
• Die Kinase initiiert eine Mitogen-aktivierte Proteinkinase (MAPK)-Kaskade durch sequenzielle Phosphorylierung der doppelt spezifischen MAPK-Kinasen (MAP2K1/MEK1 und MAP2K2/MEK2) und der extrazellulären signalregulierten Kinasen (MAPK3/ERK1 und MAPK1/ERK2).
• RAF1 phosphoryliert diverse Substrate: BAD (an Ser-75, über PAK1), Adenylylcyclasen (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (hemmt die Phosphataseaktivität) und TNNT2; es fördert zudem die NF-κB-Aktivierung und hemmt die Kinasen ROCK2, ASK1 und MST2.
• Das Protein schützt Zellen vor Apoptose, indem es zu Mitochondrien transloziert, dort an BCL2 bindet und BAD verdrängt; es beschränkt zudem die Caspase-Aktivierung als Reaktion auf Fas-Stimulation, pathogenvermittelte Makrophagenapoptose und erythroide Differenzierung.
• RAF1 trägt zur onkogenen Transformation bei, indem es das Tight-Junction-Protein Occludin (OCLN) durch Induktion der Hochregulation des Transkriptionsrepressors SNAI2/SLUG repriminiert.
• Die subzelluläre Lokalisation umfasst Zytoplasma, Zellmembran, Mitochondrium und Zellkern, was seine vielseitigen regulatorischen Rollen widerspiegelt.
• Das Protein verfügt über eine Zinkfingerdomäne, bindet ATP und unterliegt Phosphorylierung (z. B. S621), Methylierung und alternativem Spleißen (Isoform 1 ist häufiger im Skelettmuskel).
• Schlüsselwörter im Zusammenhang mit RAF1 sind Kardiomyopathie, Taubheit, Krankheitsvariante, Protoonkogen und Serin/Threonin-Proteinkinase, was seine Beteiligung sowohl an normaler Physiologie als auch an Krankheiten zeigt.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid; stellen Sie sicher, dass Proben während der Lyse und Präparation mit Phosphataseinhibitoren verarbeitet werden, um den Phosphorylierungsstatus zu erhalten.
• Erwarten Sie bei Western Blotting eine Bande bei etwa 73 kDa; verwenden Sie geeignete Kontrollen wie phosphatasebehandelte Lysate oder stimulierte vs. nicht stimulierte Zellen, um die Phosphospezifität zu bestätigen.
• Da die RAF1-Phosphorylierung dynamisch ist, erwägen Sie die parallele Verwendung eines gesamten RAF1-Antikörpers, um Signale zu normalisieren und Aktivierungsänderungen korrekt zu interpretieren.
• Optimieren Sie im ELISA die Beschichtungsantigenkonzentration und die Antikörperverdünnung; eine Standardkurve mit einem bekannten Phosphopeptid kann die Quantifizierung unterstützen.
• Kreuzreaktivität mit Rattengewebe wurde nachgewiesen; validieren Sie die Leistung des Antikörpers in Ihrem spezifischen Ratten-Modellsystem, da die Signalintensität zwischen Proben variieren kann.

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