Anti-Phospho-Raf1 (R259) Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IP, ELISA - P04049

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RAF1-Funktion und -Lokalisierung

• RAF1 (auch bekannt als c-Raf oder Raf-1) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die als kritisches regulatorisches Bindeglied zwischen membranassoziierten Ras-GTPasen und der MAPK/ERK-Signaltransduktionskaskade fungiert und die Zellentscheidungen wie Proliferation, Differenzierung, Apoptose, Überleben und onkogene Transformation steuert.
• Nach Aktivierung initiiert RAF1 eine mitogenaktivierte Proteinkinase-Kaskade (MAPK) durch sequenzielle Phosphorylierung dualspezifischer MAPK-Kinasen (MAP2K1/MEK1 und MAP2K2/MEK2) und extrazellulär signalregulierter Kinasen (MAPK3/ERK1 und MAPK1/ERK2).
• RAF1 phosphoryliert multiple Downstream-Ziele, einschließlich BAD (an Ser-75), Adenylylcyclasen (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (Hemmung der Phosphataseaktivität) und TNNT2 (kardiales Troponin T), und moduliert so Apoptose, cAMP-Signalisierung und kardiale Funktion.
• Das Protein kann die NF-kB-Aktivierung fördern und Signaltransduktoren hemmen, die an Motilität (ROCK2), Apoptose (MAP3K5/ASK1 und STK3/MST2), Proliferation und Angiogenese (RB1) beteiligt sind, was seine breiten regulatorischen Rollen unterstreicht.
• RAF1 wurde mit der onkogenen Transformation von Epithelzellen in Verbindung gebracht, indem es den Transkriptionsrepressor SNAI2/SLUG hochreguliert, der das Tight-Junction-Protein Okkludin (OCLN) herunterreguliert, und es beschränkt die Caspase-Aktivierung als Reaktion auf Fas-Stimulation, pathogenvermittelte Makrophagenapoptose und Erythroiddifferenzierung.
• Subzellulär kommt RAF1 im Zytoplasma, der Zellmembran, dem Mitochondrium und dem Kern vor, wobei die Translokation zu den Mitochondrien die Bindung an BCL2 und die Verdrängung von BAD ermöglicht, um die Zellen vor Apoptose zu schützen.
• Das Protein enthält eine Zinkfingerdomäne, unterliegt einer Phosphorylierung (einschließlich an Ser259, das von diesem Antikörper erkannt wird) und spielt Rollen bei der Wundheilung, Rho-Signalisierung und Migration.
• In der Skelettmuskulatur ist Isoform 1 häufiger als Isoform 2; RAF1 ist mit Erkrankungen wie Kardiomyopathie und Taubheit (CMD1NN) assoziiert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das den Bereich Ser259 von humanem RAF1 abdeckt. Dieses Design zielt theoretisch auf das phosphorylierte Epitop ab; Benutzer sollten jedoch die Phosphospezifität validieren, indem sie die Signale zwischen phosphatasebehandelten und unbehandelten Lysaten in ihrem experimentellen System vergleichen.
• Da der Antikörper im Kaninchen gegen ein humanes Peptid erzeugt wurde, ist eine Kreuzreaktivität mit anderen Spezies nicht garantiert; validieren Sie dies im entsprechenden Probenystem, wenn nicht-menschliche Modelle verwendet werden.
• Für den Western Blot (WB) wird eine Bande um 73 kDa erwartet. Verwenden Sie geeignete Blockier- und Waschbedingungen, um unspezifische Bindungen zu minimieren, und fügen Sie eine Positivkontrolle (z. B. stimulierte Zelllysate) hinzu, um die phosphospezifische Detektion zu bestätigen.
• In der Immunpräzipitation (IP) und ELISA kann der Antikörper wie angezeigt funktionieren; erwägen Sie eine Optimierung der Antikörperkonzentrationen und Pufferbedingungen für Ihren spezifischen Assay.
• Vermeiden Sie wiederholte Gefrier- und Auftauzyklen; aliquotieren Sie und lagern Sie bei -20°C oder wie empfohlen.

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