Anti-Phospho-Raf1-S259 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB und ELISA - P04049

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: RAF1-Funktion und Lokalisation

• RAF1 (auch bekannt als c-RAF oder Raf-1) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die als kritische regulatorische Verbindung zwischen membrangebundenen Ras-GTPasen und der nachgeschalteten MAPK/ERK-Signalkaskade dient und Zellschicksalsentscheidungen wie Proliferation, Differenzierung, Apoptose und Überleben steuert.
• Nach Aktivierung phosphoryliert und aktiviert RAF1 die dual-spezifischen Kinasen MEK1/2, die wiederum ERK1/2 phosphorylieren und Signale weiterleiten, die die Genexpression und zelluläre Reaktionen regulieren.
• Phosphoryliertes RAF1 (z.B. an Ser-338 und Ser-339) phosphoryliert direkt das pro-apoptotische Protein BAD und fördert das Zellüberleben. Es phosphoryliert auch Adenylatcyclasen (ADCY2/5/6) und moduliert die Phosphatase PPP1R12A.
• RAF1 beeinflusst mehrere Signalwege: Es kann die NF-κB-Aktivierung fördern, während es Effektoren wie ROCK2 (Motilität), ASK1/MST2 (Apoptose) und RB1 (Proliferation/Angiogenese) hemmt.
• Unter apoptotischen Stimuli kann RAF1 zu den Mitochondrien translozieren, wo es BCL2 bindet und BAD verdrängt, was einen zusätzlichen anti-apoptotischen Mechanismus bietet.
• RAF1 spielt eine Rolle bei der Zellmigration durch Regulierung der Rho-Signalgebung und wird für die normale Wundheilung benötigt. Es trägt auch zur onkogenen Transformation durch transkriptionelle Repression von Tight-Junction-Proteinen wie Occludin (OCLN) bei.
• Das Protein ist hauptsächlich im Zytoplasma und an der Zellmembran lokalisiert, kann aber unter bestimmten Bedingungen auch in den Mitochondrien und im Zellkern vorkommen.
• RAF1 wird in verschiedenen Geweben exprimiert; im Skelettmuskel ist Isoform 1 häufiger als Isoform 2.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches phosphoryliertes Peptid, das auf Ser259 von humanem RAF1 (P04049) zentriert ist. Der resultierende Antikörper sollte spezifisch RAF1 erkennen, wenn es an Ser259 phosphoryliert ist; bestätigen Sie die Spezifität durch Vergleich der Signale zwischen Phosphatase-behandelten und unbehandelten Proben.
• Für den Western Blot (WB) verwenden Sie einen Proteinextrakt aus humanen oder Rattenzellen, von denen bekannt ist, dass sie RAF1 exprimieren. Unter reduzierenden Bedingungen sollte ein Band bei etwa 73 kDa beobachtet werden. Schließen Sie immer geeignete positive und negative Kontrollen ein (z.B. serum-ausgehungerte vs. wachstumsfaktor-stimulierte Lysate).
• Für ELISA titrieren Sie den Antikörper gegen das phosphorylierte Peptid-Immunogen und validieren Sie ihn in einer relevanten biologischen Matrix, um einen linearen Nachweis zu gewährleisten. Erwägen Sie die Paarung mit einem Gesamt-RAF1-Antikörper, um die Phosphorylierungsniveaus zu normalisieren.
• Da der Antikörper auf Eisbeuteln geliefert wird, vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Tau-Zyklen und lagern Sie ihn unter den empfohlenen Bedingungen, um die Aktivität zu erhalten.

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